PCR-diagnostiek gebruiken

Share Tweet Pin it

Polymerase-kettingreactie (PCR) in de moleculaire biologie wordt de experimentele methode voor virusdetectie genoemd. Het maakt het mogelijk om de concentratie van bepaalde fragmenten van nucleïnezuur (DNA) in monsters van biologisch materiaal aanzienlijk te verhogen, wat het mogelijk maakt ze te bepalen (herkennen) en te tellen.

De analyse wordt als volgt uitgevoerd. Genetisch materiaal (een bloedmonster), dat mogelijk het gewenste gen kan bevatten, wordt in een reageerbuis ingebracht. Ook daar worden primers geplaatst - chemisch gesynthetiseerde kleine lengten van het gewenste gen.

Het DNA- of RNA-polymerase wordt ook aan het vat toegevoegd, het is in staat om een ​​nucleïnezuurketen te bouwen die volledig identiek is aan de oorspronkelijke. Een reeks van vier vrije nucleotiden, een speciaal bouwmateriaal voor RNA of DNA, waarvan er één radioactieve deeltjes van fosfor bevat, wordt ook in de resulterende samenstelling ingebracht.

Het resulterende mengsel wordt verwarmd tot 95-96 ° C, waardoor de twee DNA-helices, die in de gebruikelijke toestand zijn verweven, worden ontrafeld. Vervolgens wordt het preparaat gekoeld, op dit moment hechten de primers zich aan het gewenste gebied van het virusgenoom, zonder toe te staan ​​dat RNA (of DNA) opnieuw een dubbele helix vormt.

Tijdens het afkoelen zoekt het polymerase naar een vrije keten van nucleotiden. Voor de werking van dit enzym is een enkele keten van nucleotiden nodig. Omdat het polymerase langs de DNA-streng slipt (zoals een ring met een touw), kan het niet werken op een dubbele helix.

Hierna wordt een herhaalde verwarmingscyclus uitgevoerd, waardoor de nucleotide-ketens worden gescheiden. Voor elk van deze PCR-cycli neemt de hoeveelheid van het gewenste hepatitis-gen in het monster toe in een geometrische progressie, en de rest van het genetische materiaal wordt lineair geproduceerd.

Na het zuiveren van de oplossing van de nucleotide-residuen en het scheiden van de DNA-strengen door de molecuulgewichtsparameter van de elektroforese, is het gemakkelijk om te bepalen of het gewenste gen in het testmonster aanwezig is of niet.

Voordelen van PCR

Een laboratoriumonderzoek met behulp van de PCR-methode maakt het mogelijk om nog meer informatie te verkrijgen dan alleen de aanwezigheid van het RNA-virus. Bij het bepalen van de parameter van het niveau van radioactieve straling, is het mogelijk om te bepalen welke hoeveelheid genetisch materiaal aanvankelijk in het onderzochte monster aanwezig was. Stel in geval van hepatitis het niveau van de virale lading vast.

Een ander voordeel van deze methode is de zeer hoge gevoeligheid van de CR-reactie. Het is veel hoger dan de klassieke methoden voor het detecteren van virussen. In het ideale geval is, om het gewenste gen te identificeren, slechts één virus in het monster voldoende voor PCR.

Bovendien is PCR volledig specifiek. De primers zijn zo gemaakt dat ze volledig overeenkomen met de unieke delen van de gewenste genen, die geen enkele andere sequentie heeft. Beide vingerafdrukken zijn uniek en in elk gen zijn er unieke sequenties van nucleotiden.

Kwalitatieve PCR-analyse

Kwalitatieve analyse onthult alleen de aanwezigheid van een virus in het bloed. Deze test moet worden uitgevoerd voor alle patiënten waarvan is vastgesteld dat ze antilichamen tegen hepatitis C in hun bloed hebben Het resultaat kan slechts één van de twee waarden zijn: "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd". Bij een gezond persoon moet de norm (referentiewaarde) "niet gedetecteerd" worden.

Er is ook een speciale interpretatie van dergelijke resultaten van het uitgevoerde kwalitatieve onderzoek:

  • Het resultaat is "ontdekt". Dit betekent dat het monster van biologisch materiaal die werd gevonden door een RNA-fragment dat specifiek is voor het hepatitis C-virus Bijgevolg is het feit van de patiënt met hepatitis B virusinfectie bij C. Indien het resultaat van de kwalitatieve PCR "ontdekt", betekent dit dat het virus repliceert en op dit moment infecteert het nieuwe levercellen in het lichaam.
  • Het resultaat is "niet gedetecteerd". Dergelijke uitspraak geeft aan dat in het monster van biologisch materiaal verkregen RNA-fragment wordt niet gedetecteerd in het laboratorium, dat specifiek is voor hetzij HCV RNA dezelfde concentratie van het pathogeen infectie in het monster was beneden de gevoeligheid van de test.

In de acute fase van het hepatitis C-virus-RNA kunnen kwalitatieve onderzoeken met behulp van de PCR-techniek na 1-2 weken onmiddellijk na infectie van het lichaam worden aangetoond, dat wil zeggen lang voordat antilichamen tegen de hepatitis zelf verschijnen.

Onbetrouwbare resultaten van analyses van een dergelijk onderzoek kunnen worden verkregen met:

  • besmet biomateriaal;
  • aanwezigheid van heparine in het bloed van de patiënt;
  • aanwezigheid in het monster van chemische of eiwitstoffen (remmers) die verschillende componenten van PCR beïnvloeden.

Voor de kwalitatieve analyse van PCR is een speciale voorbereiding van de patiënt voor het onderzoek niet vereist. Veneus bloed wordt als materiaal gebruikt.

Evaluatie van resultaten

Kwalitatieve PCR-tests hebben een zekere gevoeligheid, en afhankelijk van de nauwkeurigheid van het onderzoek, kan het niveau van apparatuur in het laboratorium variëren van 10 tot 500 IE / ml.

Dit betekent dat als het virus in het bloedmonster aanwezig is in een zeer lage concentratie (minder dan de gevoeligheidsdrempel van het gegeven laboratorium), de patiëntpatiënt kan worden bepaald als "niet gedetecteerd". Hierdoor wanneer zij de kwalitatieve analyse van PCR met lage viremie (virus lage concentratie), bijvoorbeeld voor patiënten die behandeling van antivirale therapie, is het belangrijk te weten, en de drempelwaarde van de gevoeligheid van het diagnosesysteem.

Varianten van diagnostische systemen

Om de virologische respons te controleren, wordt antivirale behandeling aanbevolen voor het gebruik van diagnostische systemen met een sensitiviteitsdrempel van ten minste 50 IE / ml. Deze voorwaarden wordt voldaan, bijvoorbeeld: analysatoren Cobas Ampicolor HCV Test (c nauwkeurigheid van 50 IU / ml) en RealBest HCV RNA (met een gevoeligheid van 15 IU / ml).

Volgens de WHO voor het vaststellen van een definitieve diagnose van hepatitis C moet berusten op basis van drievoudige detectie van RNA virus in serummonsters van een patiënt zonder andere soorten hepatitis marker.

Naast PCR-methoden wordt ook een TMA-onderzoek (transcriptionele amplificatiemethode) gebruikt om HCV-RNA bij patiënten te detecteren. Het heeft de beste gevoeligheidsdrempel (5-10 IE / ml), maar in ons land is deze testmethode nog niet heel gebruikelijk.

Het bereik van gedetecteerde wijzigingen van virussen

Deze kwalitatieve bepaling in het serum van de aanwezigheid van RNA van hepatitis C-virus maakt het mogelijk om verschillende genotypen van dit virus te bepalen. Momenteel kent de wetenschap meer dan zes genotypen van dit virus, evenals ongeveer 10 subtypen van de ziekte.

Virussen van 1, 2, 3 genotypen komen vaak voor in ons land. Laboratoria kunnen de volgende genotypen identificeren: 1a en 1b, 2a, 2b en 2c, en 3, 4, 5a en 6, ongeacht subtypes. Voor alle virusmodificaties is de specificiteit van de detectie 100%.

Kwantitatieve analyse van PCR

Met behulp van een kwantitatieve PCR-test wordt het niveau van de hepatitis-virusconcentratie in bloedmonsters bepaald (virale lading). Met deze test voor viremie (de concentratie van het virus) kunt u het aantal eenheden bepalen van een specifiek genetisch materiaal (het meest virale RNA), dat in een bepaalde hoeveelheid wordt gedetecteerd. Bepaal in dit geval de concentratie in 1 ml, wat overeenkomt met 1 cu. cm.

De kwantitatieve parameters van de analyse zijn uitgedrukt in cijfers, voor dit gebruik als maateenheid internationale eenheden (IU) per milliliter (ml), aangegeven als ME / ml. Nu kan in sommige laboratoria de hoeveelheid van het virus in andere eenheden worden bepaald: het aantal kopieën per ml wordt aangeduid als kopieën / ml.

  • Timing Voor hepatitis C wordt een dergelijke kwantitatieve analyse van PCR uitgevoerd net voor het begin van de therapie. Dan op de 1e, 4e, 12e en 24e week. Evaluatie op de 12e week is indicatief, het maakt het mogelijk om de effectiviteit van de therapie te bepalen.
  • Voorbereiding voor analyse. Voor de kwantitatieve analyse van PCR is een speciale voorbereiding van de patiënt voor het onderzoek niet vereist. Een half uur voor het nemen van monsters mag u niet roken. Veneus bloed wordt gebruikt als laboratoriummateriaal.

Evaluatie van resultaten

Voor verschillende laboratoriumtestsystemen zijn er verschillende conversiefactoren voor deze indicator in IE / ml. Gemiddeld wordt een conversieparameter gebruikt, waarbij 4 kopieën / ml = 1 IU / ml. Dat is bijvoorbeeld het geval als het laboratorium het resultaat van PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopieën / ml geeft, dan moet deze parameter worden gedeeld door 4 en krijgen we 6 * 10 5 IU / ml.

Een hoog ladingsniveau van 800.000 IU / ml wordt als hoog beschouwd, wat ongeveer equivalent is aan een index van 3.000.000 kopieën / ml. Lage viremie komt, volgens sommige auteurs, overeen met de parameters van kwantitatieve PCR lager dan 400.000 IU / ml.

Als resultaat van de kwantitatieve test kunnen de eindresultaten niet in de vorm van een digitale waarde worden geleverd, maar: "onder het meetbereik" of "niet gedetecteerd".

  • Evaluatie: "onder het meetbereik". Dit geeft aan dat de kwantitatieve test geen hepatitis C-viraal RNA kon detecteren, maar het virus zelf is in zeer kleine concentraties in het lichaam aanwezig. Dit wordt aangegeven door een aanvullende kwalitatieve test, die het feit van de aanwezigheid van het virus bevestigt.
  • Evaluatie: "niet gedetecteerd". Dit resultaat geeft aan dat de kwantitatieve test geen virus in het RNA-monster detecteerde.

De parameter van de virale lading, in de eerste plaats, bepaalt de mate van infectiviteit van de ziekte, het niveau van "infectiousness" van de patiënt. Hoe hoger de concentratie van het virus door de patiënt, hoe groter de kans dat het aan andere mensen wordt overgedragen. Bijvoorbeeld wanneer u seks hebt met een zieke persoon of een verticaal pad. Zo'n kwantitatieve indicator helpt ook om de effectiviteit van de behandeling van de patiënt te bepalen.

Het uitvoeren van een kwantitatieve analyse van PCC is belangrijk voor antivirale therapie, het evalueren van het succes ervan en het plannen van de duur van de cursus. Dus, met de snelle reactie van het lichaam op de behandeling en een lage graad van viremie, kan de duur van de therapie worden verminderd.

Met een langzame afname van de kwantitatieve PCR-parameter moet antivirale therapie worden uitgebreid of aangepast. Als het niveau van de virale last laag is, dan is dit een gunstige factor van de therapie, als deze hoog is, dan is de toegepaste behandelmethode niet effectief en moeten geneesmiddelen of methoden voor het gebruik ervan worden gewijzigd.

Analyse van PCR voor hepatitis

PCR OP HEPATITIS C

  1. RNA van hepatitis C ( "PCR-kwaliteit") - detectie in de analyse van bloed is een bewijs van acute of chronische hepatitis C wordt bepaald uit de 2e week van de infectie, verschijnt voor anti-HCV, waarbij de ziekte te diagnosticeren in de vroege stadia. Bepaling van RNA wordt uitgevoerd bij patiënten met acute klinische hepatitis B en patiënten met een positieve test voor hepatitis.
  2. RNA van hepatitis C ("PCR-kwantitatief") - virale belasting - een van de indicatoren voor de effectiviteit van antivirale therapie en de evaluatie ervan (door het niveau te veranderen van de beginwaarde). De kwantitatieve karakterisering van het gehalte aan hepatitis C-RNA is belangrijk voor het evalueren van de effectiviteit van antivirale therapie en is van prognostisch belang voor het bepalen van de chroniciteit. Patiënten met hoge virale lading (grote hoeveelheden RNA) vóór de behandeling reageren slechter op de behandeling.
  3. RNA van hepatitis C (genotypen 1, 2, 3) - Het type behandeling hangt af van het type en de effectiviteit ervan. De ziekte veroorzaakt door het virus van genotype 1 is het meest ongunstig met betrekking tot de prognose van de effectiviteit van therapie. Volgens de huidige aanbevelingen moet vóór het begin van de antivirale therapie een bloedtest voor ons genotyping van hepatitis C worden uitgevoerd.
  4. RNA van hepatitis C (uitgebreide genotypering 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - op het grondgebied van Rusland circuleren 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a subtypes. Hepatitis C, veroorzaakt door het virus van genotypen 1 en 4, is het meest ongunstig met betrekking tot de prognose.
  5. Ultrasensitieve PCR voor hepatitis C (kwalitatieve methode) - de analyse wordt gebruikt om de ziekte te diagnosticeren in de vroege stadia van infectie, is optimaal voor het testen van bloeddonatie en het beoordelen van de respons op antivirale behandeling. Deze studie, zelfs bij afwezigheid van antilichamen tegen het hepatitis C-virus, wordt aanbevolen voor patiënten met een leverziekte van niet-gespecificeerde oorzaak, met verworven immuundeficiëntie of met immunosuppressieve therapie.
  6. Ultrasensitieve PCR voor hepatitis C (kwantitatieve methode) - unieke analyse met hoge gevoeligheid (10 IU / ml) voor de bepaling van hepatitis C-virus-RNA in kwantitatieve termen. De studie wordt gebruikt om de effectiviteit van de therapie te controleren.

PCR OP HEPATITIS B

  1. Hepatitis B DNA (kwalitatieve analyse) - de index van de reproductie van het hepatitis B-virus, verschijnt eerst in het bloed, gemiddeld 1 maand na infectie. In sommige gevallen is het de enige marker van latente HBV-infectie. Bepaling van het DNA van het virus maakt het mogelijk om hepatitis B te diagnosticeren veroorzaakt door mutante stammen, waarin andere markers van infectie niet worden gedetecteerd.
  2. Hepatitis B-DNA (kwantitatieve analyse) - DNA-concentratie (virale lading) is een van de tests die wordt gebruikt om het stadium van chronische hepatitis B en de werkzaamheid van antivirale therapie te bepalen. De analyse wordt vóór en tijdens de behandeling uitgevoerd.
  3. Genotypering van hepatitis B - ziekten veroorzaakt door verschillende genotypen van het virus kunnen verschillen in het klinische beloop en de uitkomst. Hepatitis B, veroorzaakt door het virus van genotype C, neemt vaak een chronisch beloop en heeft een hoog risico op transformatie naar cirrose van de lever of hepatocellulair carcinoom. Patiënten geïnfecteerd met genotype A-virus reageren beter op de behandeling.
  4. Ultrasensitieve DNA-PCR voor hepatitis B (kwalitatieve methode) - geeft ze over voor een vroege detectie van de ziekte. Zeer informatief in de studie van donorbloed. Kan worden gebruikt om spontane of door behandeling geïnduceerde verwijdering van het virus uit het menselijk lichaam te bevestigen.
  5. Ultrasensitieve PCR voor hepatitis C (kwantitatieve methode) - diagnose van hepatitis B-virus-DNA in kwantitatieve termen. De analyse wordt uitgevoerd om de effectiviteit van de therapie te evalueren.
  6. Bepaling van mutaties van resistentie tegen antivirale geneesmiddelen lamivudine, telbivudine, entecavir, adefovir, tenofovir (gegeven samen met de analyse van "hepatitis B-kwantitatief DNA"). Om de analyse te doorstaan, is het noodzakelijk voor patiënten met chronische hepatitis B vóór het begin van de antivirale therapie en tijdens de toediening van geneesmiddelen. Het resultaat bevat informatie over de beschikbaarheid van resistentie tegen hepatitis B-virus tegen antivirale geneesmiddelen:
    • R - het virus is resistent tegen het antivirale geneesmiddel (resistentiemutaties tegen dit geneesmiddel zijn gedetecteerd);
    • S - het hepatitis B-virus is gevoelig voor het medicijn (de morele waarde, resistentie-mutaties worden niet gedetecteerd);
    • I - de veroorzaker van een infectie kan resistentie tegen dit medicijn veroorzaken.

Kosten van bloedonderzoek en PCR voor hepatitis C

Hepatitis C is een inflammatoire pathologie waarbij de levercellen worden aangetast. De ziekte ontstaat door de penetratie van het hepatitis C-virus (HVC) in het menselijk lichaam.

De vorm van de ziekte kan acuut of chronisch zijn.

Meestal symptomen van acute vormen van de ziekte, de meeste patiënten niet beschikbaar zijn, soms de ziekte gaat gepaard met pijn in de buik, verminderde prestaties, toegenomen vermoeidheid, eetstoornissen, donkere schaduw van urine, verkleuring van ontlasting, gele kleur van de huid en slijmvliezen, gewrichtspijn. Er zijn 6 tot 8 weken na infectie symptomen zoals regel, maar deze kunnen zich na zes maanden manifesteren.

Met de ontwikkeling van dergelijke verschijnselen is het noodzakelijk om een ​​aanvraag voor een medische instelling in te dienen en een uitgebreid onderzoek van het hele organisme te ondergaan. Als onderdeel van een medisch onderzoek wordt een bloedtest voor hepatitis C uitgevoerd.

Tegenwoordig is het, met behulp van moderne diagnostische technieken, mogelijk om deze pathologie in het beginstadium van ontwikkeling te identificeren, wat de kansen op een volledige genezing van de ziekte aanzienlijk vergroot.

Analyse van hepatitis C is verplicht voor de volgende groepen mensen:

  • vrouwen in de periode van het dragen van een kind;
  • personen met tekenen van hepatitis;
  • werknemers van medische instellingen;
  • potentiële donoren van organen en bloed;
  • drugsverslaafden, met hiv besmette personen, personen die een ongeordend, intiem leven leiden.

Lijst met noodzakelijke onderzoeken

Welke tests moet ik nemen met hepatitis C? Om een ​​ziekte nauwkeurig te diagnosticeren, de oorzaken vast te stellen en de conditie van het leverparenchym te bepalen, is het noodzakelijk om de volgende onderzoeken uit te voeren:

  • algemene analyse van urine en bloed;
  • biochemische bloedanalyse;
  • PCR-analyse;
  • bloedtest voor de detectie van antilichamen tegen HVC;
  • een bloedtest voor beschikbare antilichamen tegen zijn eigen hepatische cellen;
  • een leverbiopsie.

De interpretatie van de bloedtest voor hepatitis C wordt uitgevoerd door een specialist. Laten we elke onderzoeksmethode in meer detail bekijken, en we zullen ook begrijpen wat voor soort analyse voor hepatitis C het meest accuraat is.

Algemene analyse

Bij het uitvoeren van een algemene bloedtest op hepatitis C, kunt u de toestand van de patiënt beoordelen. Veranderingen in bloedtellingen worden niet gezien als specifieke symptomen van hepatitis, maar met deze ziekte zijn er schendingen zoals:

  • de concentratie van hemoglobine, bloedplaatjes en leukocyten neemt af;
  • het gehalte aan lymfocyten neemt toe;
  • bloedcoagulatie is verstoord;
  • de snelheid van erythrocytsedimentatie (ESR) neemt toe.

De algemene analyse van urine maakt het mogelijk om in zijn samenstelling urobeline te detecteren - een galpigment dat in de urine verschijnt als gevolg van een defect van de lever.

Biochemische analyse

Biochemische analyse van bloed bij hepatitis C stelt ons in staat om dergelijke schendingen te identificeren als:

  • verhoogde leverenzymen (alanine transaminase - ALT en AST - AST) die het bloed voeren wanneer beschadigde hepatocyten. In de normale toestand zouden deze indicatoren bij mannen niet hoger mogen zijn dan 37 IE / l, bij vrouwen - niet hoger dan 31 IE / l. Verhoogde concentratie van ALT en AST bij hepatitis C, asymptomatische, vaak het enige symptoom van de ziekte. Bovendien verhoogt de bloedspiegel glutamyl alkalische fosfatase (gewoonlijk niet meer dan 150 IU / l).
  • het gehalte aan bilirubine (zowel totaal als direct) in het bloed wordt overschreden. Als het niveau van het gele pigment in het serum hoger zijn dan 27-34 umol / L, geelzucht optreden (tot 80 mol / l op een eenvoudige wijze, 86-169 pmol / L - matig boven 170 mmol / l - ernstige vorm).
  • Verminderde het niveau van albuminen, de concentratie van gamma-globulines, in tegendeel, toegenomen. Gamma-globulines bestaan ​​uit immunoglobulines - antilichamen, die het lichaam beschermen tegen ziekteverwekkers.
  • verhoogde concentratie van triglyceriden in het bloed.

PCR-onderzoek

Met behulp van de PCR-techniek is het mogelijk om een ​​pathogeen te diagnosticeren. Het uitvoeren van deze analyse maakt het mogelijk om een ​​virus in het bloed te detecteren, zelfs als de hoeveelheid ervan minimaal is. PCR analyse van hepatitis C toelaat de bestaande infectie reeds bepaald na 5 dagen na infectie, dat wil zeggen, lang voordat de antilichamen verschijnen.

Als het resultaat van een bloedtest op hepatitis C met de PCR-methode positief is, duidt dit op de aanwezigheid van een actieve infectie in het lichaam. Met behulp van deze methode kan een kwalitatieve en kwantitatieve studie van HVC RNA worden uitgevoerd.

In de loop van de kwalitatieve analyse van PCR voor hepatitis C is het mogelijk om een ​​bestaand virus in het menselijk lichaam te detecteren.

Een dergelijke diagnostische procedure wordt uitgevoerd als een anti-HVC in het bloed wordt gedetecteerd.

De transcriptie van de analyse voor hepatitis C bevat informatie dat de infectie in het lichaam wordt gedetecteerd of niet wordt gedetecteerd. In de normale toestand worden pathologische stoffen in het bloed niet gedetecteerd.

Als de analyse voor hepatitis C een positief resultaat geeft, geeft dit aan dat het pathogene micro-organisme continu verdeeld is en de hepatische cellen beïnvloedt.

De resultaten van een dergelijke analyse kunnen onbetrouwbaar zijn, het is mogelijk in de volgende gevallen:

  • verontreiniging van het gebruikte biomateriaal;
  • als er heparine in het bloed zit;
  • in de aanwezigheid van chemische of proteïnestoffen (remmers) in het biomateriaal dat wordt onderzocht, en die de elementen van PCR beïnvloeden.

De kwantitatieve analyse van hepatitis C geeft informatie over de hoeveelheid van het virus in het bloed, dat wil zeggen, het bepaalt de virale last. Deze term betekent de hoeveelheid HVC-RNA die in het bloed aanwezig is (bijv. 1 ml). In de interpretatie van de kwantitatieve analyse voor hepatitis C wordt deze waarde uitgedrukt in een digitaal equivalent, gemeten in IE / ml.

Bloed voor PCR in hepatitis C wordt vóór de therapeutische maatregelen genomen. Nadat de analyse is uitgevoerd na 1, 4, 12 en 24 weken. De studie in week 12 is indicatief en wordt uitgevoerd om de effectiviteit van lopende behandelingsprocedures te beoordelen.

Als de analyse van hepatitis C tijdens de zwangerschap positief is en de virale last wordt overschreden, is het risico van overdracht van ziekteverwekkers van de zieke moeder op het kind meerdere malen toegenomen. Ook is, met verhoogde virale belastingswaarden, de implementatie van therapeutische maatregelen moeilijk.

Volgens de analyse van hepatitis C is de virusbelasting hoger dan 800 000 IE / ml als deze hoger is. Als de cijfers lager zijn dan 400.000 IE / ml, wordt het niveau van virale lading als laag beschouwd.

De analyse van hepatitis C met behulp van de PCR-methode wordt als de meest accurate beschouwd en heeft verschillende voordelen ten opzichte van andere onderzoeksopties, namelijk:

  • directe diagnose van de ziekteverwekker. Bij het uitvoeren van traditionele studies, wordt de aanwezigheid van eiwitmarkers, die de producten zijn van de vitale activiteit van pathogene stoffen, bepaald. Er staat alleen dat de infectie in het bloed aanwezig is. Wanneer de analyse voor hepatitis C wordt uitgevoerd met behulp van de PCR-methode, is het mogelijk om het type veroorzaker van een gevaarlijke pathologie te bepalen.
  • specificiteit van de methodologie. Tijdens deze procedure wordt een uniek DNA-gebied geïdentificeerd in het biomateriaal dat overeenkomt met slechts één type pathogeen. Dit maakt het mogelijk om de kans op het verkrijgen van onbetrouwbare resultaten te minimaliseren.
  • hoge gevoeligheid. Bij het uitvoeren van PCR-analyse kan een minimale hoeveelheid van het virus worden gedetecteerd. Dit is belangrijk als conditioneel pathogene stoffen worden geïdentificeerd die alleen een bedreiging vormen als hun niveau wordt verhoogd.
  • bij gebruik van deze techniek kunnen verschillende pathogenen in één biomateriaalmonster worden gedetecteerd.
  • het is mogelijk om verborgen infecties te detecteren. Bovendien kunt u met de analyse ziekteverwekkers diagnosticeren die in cellen leven en een hoge antigene variabiliteit hebben.

Als de resultaten van de studie positief zijn, worden de sporen van het virus gevonden in het biomateriaal, waarna het netwerk in het lichaam een ​​infectie heeft.

Negatieve analyse van PCR voor hepatitis C betekent dat er geen sporen van infectie in het biomateriaal zijn.

Immunologisch onderzoek

Met deze methode kunt u antilichamen tegen alle typen van het hepatitis-virus identificeren, evenals antilichamen tegen de hepatische cellen in uw lichaam, die worden bevorderd door de ontwikkeling van auto-immune hepatitis.

De resultaten die tijdens het onderzoek zijn verkregen, zijn 3 maanden relevant, daarna moet u opnieuw bloed doneren voor hepatitis C.

Het is ook mogelijk om express onderzoek uit te voeren met behulp van speciale teststrips. Deze analyse maakt het mogelijk de antilichamen tegen het virus in het bloed en speeksel te bepalen, een dergelijke procedure kan onafhankelijk thuis worden uitgevoerd.

Lever biopsie

Om een ​​dergelijke analyse uit te voeren, wordt een element van het leverparenchym genomen en wordt een histologisch onderzoek van het resulterende biomateriaal uitgevoerd. Dit stelt ons in staat om de conditie van het orgaan te beoordelen: om inflammatoire, necrotische foci, het stadium van fibrose en dergelijke te identificeren.

Tegenwoordig worden tests gebruikt die de histologische analyse van het leverparenchym vervangen.

Gebruik de specifieke biomerkers van veneus bloed om het stadium van leverschade en de intensiteit van het ontstekingsproces te beoordelen. Met behulp van Fibrotest is het mogelijk om de mate van fibreuze weefselproliferatie vast te stellen.

Bij het uitvoeren van Actitest kan informatie worden verkregen over de intensiteit van pathologische processen in het leverparenchym. Gebruik van Steatotest kan de vette degeneratie van leverweefsel diagnosticeren en de mate van dit proces beoordelen. Fibromax bestaat uit alle bovenstaande tests en kan enkele andere onderzoeken omvatten.

Voorbereiding op de studie

Welke tests worden uitgevoerd voor hepatitis C en hoe dit of dat type onderzoek wordt uitgevoerd, kwamen we te weten. Het is even belangrijk om te weten hoe je je moet voorbereiden op de analyse.

Voor het verkrijgen van betrouwbare resultaten wordt aanbevolen om te voldoen aan de volgende vereisten:

  • Analyses van hepatitis C moeten 's morgens op een lege maag worden ingenomen. De laatste keer dat u voedsel zou moeten eten, minstens 8 uur vóór de test.
  • Biomateriaalbemonstering kan overdag of 's avonds worden uitgevoerd. In zo'n geval is het belangrijk dat er niet minder dan 5-6 uur verstrijken tussen de laatste maaltijd en de analyse.
  • Voordat bloed wordt gedoneerd voor hepatitis C, moeten thee, koffie, sap of andere dranken worden weggegooid, alleen water is toegestaan.
  • 48 uur vóór het onderzoek is het noodzakelijk om de consumptie van vet, gefrituurd voedsel en alcoholhoudende dranken uit te sluiten.
  • Gedurende minstens een uur voordat u de test uitvoert, moet u afzien van roken.
  • Voer de analyse niet onmiddellijk uit na de echografie, instrumenteel, radiologisch onderzoek, een massagesessie of fysiotherapie.
  • een dag voor het onderzoek is vereist om het gebruik van medicatie en intense lichamelijke activiteit uit te sluiten. Emotionele stress is ook gecontra-indiceerd.
  • 15 minuten voordat de test wordt aanbevolen om deze in een stille staat te houden.

Bloedbemonsteringsprocedure

Waar kan ik de test voor hepatitis C doorstaan? De verzameling biomateriaal voor verder onderzoek wordt uitgevoerd in het laboratorium van de medische instelling of bij de patiënt thuis.

Bloed uit de ader wordt als volgt genomen:

  • Met behulp van een speciale bundel rond de onderarm van de patiënt wordt de veneuze bloedstroom opgeheven. Dankzij dergelijke manipulaties worden de aderen gevuld met bloed en zullen ze meer opvallen, wat het inbrengen van de naald aanzienlijk zal vergemakkelijken.
  • Het gedeelte van de huid waar de naald wordt ingebracht, wordt zorgvuldig behandeld met alcohol of alcoholbevattende vloeistof.
  • De naald wordt voorzichtig in de ader ingebracht, waarna een reageerbuis wordt aangebracht die speciaal is ontworpen voor het verzamelen van bloed.
  • onmiddellijk nadat de naald in de ader is ingebracht, wordt de knel-tourniquet uit de hand van de patiënt verwijderd.
  • nadat het nodige volume bloed is verzameld voor de analyse, wordt de naald geleidelijk uit de ader verwijderd.
  • een steriel wattenstaafje of gaasje gedrenkt in alcohol moet op de injectieplaats worden aangebracht.
  • om het begin van een hematoom te voorkomen, moet de tampon met enige moeite worden gedrukt tot aan het gebied waar de naald wordt ingebracht, buig de arm naar het ellebooggewricht en houd deze een aantal minuten vast. Dergelijke acties helpen ook om het bloed snel te stoppen.

Gezien een goede techniek van intern beheer, is deze procedure absoluut veilig en lezen veroorzaakt geen pijnlijke sensaties.

In zeldzame gevallen, na bloedafname, is zwelling van de aderen mogelijk. Dit fenomeen wordt "flebitis" genoemd. Het probleem zal worden verlicht door comprimeren (niet heet), het moet meerdere keren per dag op opgezwollen huidgebieden worden toegepast.

Er kunnen ook bepaalde problemen zijn als er een bloedingsaandoening is. Het gebruik van aspirine, warfarine en andere bloedverdunnende medicijnen kan bloedingen veroorzaken. Daarom moet u, voordat u de analyse uitvoert, weigeren om medicijnen in te nemen. Als de behandeling niet kan worden geannuleerd, moet u de specialist hierover informeren.

Voorwaarden en prijzen

Hoeveel analyse wordt er uitgevoerd voor hepatitis C? De resultaten van een bloedtest op hepatitis kunnen binnen enkele uren en over een paar dagen (meestal niet meer dan 8 dagen) klaar zijn. De duur van de voorbereiding van de resultaten hangt af van het type virus en de gekozen analysetechniek. Het onderzoek uitgevoerd met de PCR-methode is sneller. De resultaten in dit geval zijn binnen enkele uren gereed.

Hoeveel is een analyse voor hepatitis C? Afhankelijk van de kliniek en de complexiteit van de studie, kan de prijs van de procedure variëren van 400 tot 11.000 roebel.

Opgemerkt moet worden dat het enkele weken kan duren om een ​​voldoende hoeveelheid antilichamen tegen HVC te vormen. Daarom kan in een vroeg stadium van de ontwikkeling van de pathologie het resultaat van de studie vals-negatief zijn.

Bovendien is het verkrijgen van onnauwkeurige gegevens mogelijk als de analyse slecht wordt uitgevoerd en de transportvoorwaarden voor het ontvangen biomateriaal worden geschonden (de monsters moeten maximaal 2 uur na de bloedafname aan het laboratorium worden afgeleverd).

Als het resultaat van de studie positief is, moet u onmiddellijk een arts met een besmettelijke ziekte raadplegen. De specialist voert een aanvullend onderzoek uit en schrijft de juiste behandeling voor.

Denk je nog steeds dat het moeilijk is om hepatitis C te genezen?

Te oordelen naar het feit dat u nu deze regels leest - een overwinning in de strijd tegen een leverziekte staat niet aan uw kant. En u hebt al nagedacht over therapie met interferon? Het is begrijpelijk, omdat hepatitis C een zeer ernstige ziekte is, omdat het goed functioneren van de lever een garantie is voor gezondheid en welzijn. Misselijkheid en braken, gelige of grijsachtige huidskleur, bitterheid in de mond, verduistering van urine en diarree. Al deze symptomen komen u bekend voor, niet door geruchten.

Maar misschien is het juister om geen gevolg te behandelen, maar een reden? Voor de behandeling raden we aan moderne Russische medicijnen te gebruiken: sophosbuvir en daklatasvir. Lees meer >>

Kwalitatieve en kwantitatieve analyse van PCR voor hepatitis C: negatief, positief, decodering

Hepatitis C is een virale aandoening van de lever die wordt veroorzaakt door het flavivirus HCV (van het Engelse hepatitis C-virus), dat een ribonucleïnezuur (RNA) -molecuul bevat. RNA draagt ​​de genetische code van het virus. De aanwezigheid ervan maakt de analyse van PCR voor hepatitis C mogelijk.

Het gevaar van HCV voor mensen is dat het zogenaamde serologische venster (het tijdsinterval tussen infectie en het optreden van een reactie van het immuunsysteem) vrij lang kan zijn - van enkele weken tot zes maanden.

Dit onthult de infectie niet en start de behandeling op tijd.

Afhankelijk van de individuele kenmerken van het lichaam van de gastheer, kan HCV zich manifesteren in een acute vorm en zich ook ontwikkelen als een chronische ziekte die langdurige en dure behandeling vereist. Bij het opsporen van antilichamen tegen HCV, worden een aantal laboratoriumtests uitgevoerd, waaronder PCR voor hepatitis C. Deze test wordt uitgevoerd voor alle mensen in wier bloed de antilichamen tegen HCV zijn aangetroffen.

Wat is PCR-analyse?

Laboratoriumanalyse van PCR voor hepatitis C - een studie van biologisch materiaal om de aanwezigheid van flavavirus te identificeren.

Polymerase-kettingreactie (zoals de afkorting wordt ontcijferd) toont de kwantitatieve waarde van de virale schade van het organisme, de kwalitatieve kenmerken ervan, en ook het genotype van het virus-bevattende RNA.

Op basis hiervan, evenals op basis van aanvullende analyses, worden de methode en duur van de therapie bepaald, evenals de epidemiologische factor (het risico van overdracht op een andere vervoerder).

Wat is RNA-analyse voor hepatitis C?

De hepatitis C-PCR wordt ook RNA-analyse (HCV-RNA) genoemd, omdat deze niet bekend is. Flavavirus bevat een RNA-deeltje met een viriongrootte van 30-60 nm. Een van de kenmerken van dit micro-organisme is een hoge neiging tot mutaties.

Elk van de ondersoorten (genotypes) van het virus heeft verschillende resistentie, wat verschillende behandelingsmethoden en de aard van de verdere prognose voor de patiënt veroorzaakt.

Biologisch materiaal (veneus bloed) wordt behandeld vasten en meestal getest door Real-Time PCR (zeer gevoelige real-time diagnose aan de ondergrens van 15 IU / ml werd bepaald met de geautomatiseerde gesloten systeemmodus).

Er zijn andere tests, bijvoorbeeld COBAS AMPLICOR met een gevoeligheid van 50-100 IU / ml. Voor elk laboratoriumonderzoek is de gevoeligheidsdrempel belangrijk, d.w.z. het vermogen van het reagens om de minimale concentratie van het virus in het biologische materiaal te detecteren.

Typen analyse voor hepatitis C met behulp van de PCR-methode

PCR voor hepatitis C omvat drie belangrijke componenten:

  • kwalitatieve analyse;
  • kwantitatieve analyse;
  • genotypering.

Deze tests kunnen de aard van viremie bepalen, evenals de genetische tekenen van de ziekteverwekker. Afhankelijk van de gevoeligheid van het diagnosesysteem, wordt de test eenmaal uitgevoerd en soms wordt een tweede test met een gevoeliger reagens uitgevoerd om de resultaten te bevestigen of te verfijnen.

Hoogwaardige hepatitis C-PCR

PCR-analyse voor hepatitis C-kwaliteit is een andere veel voorkomende naam voor de polymerasekettingreactiebepaling. De standaardgevoeligheid van de test, die het mogelijk maakt de aanwezigheid van een virale laesie te detecteren, ligt in het bereik van 10-500 IU / ml.

Negatieve analyse van PCR voor hepatitis C toont aan dat de concentratie van het virus in het bloed van de patiënt lager is dan de drempel van de gevoeligheid van het diagnostische systeem.

Als kwalitatieve PCR een "niet-gedetecteerd" antwoord gaf, dan is het voor de daaropvolgende behandeling belangrijk om de gevoeligheidsdrempel van het reagens te kennen.

De eiwitfracties aan flavavirus verschijnen veel later.

Kwantitatieve hepatitis-C-PCR

PCR hepatitis C-kwantitatief is een indicator van een virale belasting die het niveau van concentratie van flavavirus-RNA in het lichaam weerspiegelt. Dit is een indicator die aangeeft hoeveel fragmenten van viraal RNA zich bevinden per kubieke centimeter bloed. De resultaten van het PCR-RNA van hepatitis C in een conventioneel systeem worden uitgedrukt in internationale eenheden per milliliter (IE / ml) en kunnen op verschillende manieren worden geregistreerd, bijvoorbeeld 1,7 miljoen of 1,7 miljoen IE / ml.

Kwantitatieve PCR-diagnose van hepatitis C wordt gegeven aan patiënten vóór het begin van de antivirale therapie en in week 12 van de behandeling om de resultaten van de geselecteerde methode om HCV te bestrijden te evalueren. Virale belasting stelt u in staat om drie belangrijke indicatoren van de ziekte te identificeren:

  • infectiviteit, d.w.z. de mate van risico van transmissie van het virus van de ene drager naar de andere (hoe hoger de concentratie van flavavirus-RNA, hoe groter de kans op het infecteren van een andere persoon, bijvoorbeeld tijdens seksueel contact);
  • methode en effectiviteit van de behandeling;
  • duur en prognose van antivirale therapie (hoe hoger de virale last, hoe langer de behandeling duurt).

Kwantitatieve PCR-diagnose van hepatitis C hangt af van het type laboratoriumtest en de gevoeligheidsdrempel. De ondergrens van de norm wordt meestal beschouwd als maximaal 600.000 IE / ml, de gemiddelde waarde ligt in het bereik van 600.000-700.000 IU / ml. Resultaten van 800.000 IU / ml en hoger worden beschouwd als hoge niveaus van RNA-bevattend virus.

genotypering

Gezien de hoge mutatieactiviteit van HCV in de natuur, is het belangrijk om in het teststadium te bepalen welk genotype van het virus zich in het bloed van de patiënt bevindt. In totaal zijn 11 genotypen van het hepatitis C-virus op de planeet geregistreerd, waaronder veel ondersoorten. Op het grondgebied van de Russische Federatie zijn 1,2 en 3 gebruikelijk.

PCR-RNA van hepatitis C samen met genotypering is een zeer belangrijk onderdeel van de analyse, omdat stelt de arts in staat om de weerstand (resistentie) van het virus te bepalen, geschikte medicijnen te selecteren en een behandelingskuur voor te schrijven.

Genotypering stelt u ook in staat om indirect de conditie van de lever te bepalen. Het 3-genotype van HCV gaat bijvoorbeeld vaak gepaard met steatosis, waarbij vet zich ophoopt in de cellen van het lichaam.

De bloedtest voor PCR in hepatitis C zou een cijfer moeten geven dat het genotype bepaalt. In antwoorden van laboratoria kan worden geschreven "niet getypt" - en dit betekent dat er een virus in het menselijk bloed zit dat niet door het testsysteem wordt bepaald. Dit kan erop duiden dat het genotype niet karakteristiek is voor een bepaald geografisch gebied. In dit geval is het noodzakelijk om de analyse opnieuw te passeren met een hogere gevoeligheid van het diagnosesysteem.

Decodering van PCR-analyse voor hepatitis C

De test voor hepatitis C PCR kan worden gekwantificeerd op basis van de bovenstaande gegevens. Wanneer de resultaten van laboratoriumtests worden ontvangen, worden de volgende gegevens gewoonlijk geschreven:

  • "Found" / "not found" (hoge kwaliteit PCR voor hepatitis C);
  • de hoeveelheid RNA-bevattende fracties, bijvoorbeeld 831.680 IU / ml (kwantitatieve PCR-bepaling);
  • de figuur die het HCV-genotype bepaalt, bijvoorbeeld - 1, 2, 3, 4;
  • de naam van de test is meestal realtime.

Het belangrijkste bij het ontcijferen van de PCR-analyse voor hepatitis C is het tweede item, dat de virale lading toont die de prognose, de methode en de duur van de behandeling bepaalt.

Als PCR-analyse voor hepatitis C negatief is en ELISA positief - wat betekent dit?

Om laboratoriumtests te ontcijferen, is het belangrijk om contact op te nemen met een hepatoloog of specialist in infectieziekten, die de ontvangen informatie zal uitleggen in overeenstemming met het type diagnostisch systeem en de gevoeligheidsdrempel. In de medische praktijk zijn er veel bloedtestgegevens die een persoon zonder medische voorlichting in verwarring kunnen brengen.

Indien bijvoorbeeld de test voor HCV PCR-negatief en positief ELISA, kan worden aangegeven dat op dit moment in het bloed van de patiënt niet HCV, maar voordat hij een acute vorm van hepatitis C. leed Aangenomen wordt dat de positieve-linked immunosorbent assay (ELISA) blijkt dat in het bloed zijn er antilichamen geproduceerd na de invasie van het virus in het verleden. Maar in de moderne medische praktijk ELISA-analyse is niet voldoende betrouwbaar en geeft vaak ongebruikelijke resultaten, zodat artsen gebruiken het als een primaire screening. Bij het diagnosticeren van de ziekte worden specialisten precies door PCR-tests geleid.

Handige video

In de volgende video is het zeer gedetailleerd en interessant om te vertellen wat de essentie van de PCR-methode is, hoe de analyse is voltooid:

conclusie

Veneus bloed wordt meestal gebruikt voor analyse van hepatitis-C-PCR. Meestal is er een dubbele bemonstering van een biologisch materiaal - voor ELISA en direct voor een PCR-test. Voor de juiste testresultaten is naleving van de belangrijkste regels voor laboratoriumbemonstering van biologisch materiaal vereist:

  • bloed voor analyse wordt 's morgens op een lege maag toegediend;
  • tussen het eten en het nemen van bloed moet ten minste 8 uur duren;
  • Voordat u de test doet, moet u ook alcohol en gefrituurd voedsel uitsluiten;
  • Gedurende de dag voordat je bloed geeft, moet je een hoge fysieke inspanning vermijden.

De resultaten van bloedonderzoek zijn meestal de volgende dag klaar.

PCR-studie voor hepatitis C: types, indicaties, transcript

Virale hepatitis C is een ernstige ziekte die optreedt met leverschade. Bij tachtig procent van de patiënten gaat het over in een chronische vorm. Het virus vermenigvuldigt zich in levercellen - hepatocyten - en veroorzaakt hun dood. Dood weefsel wordt vervangen door brandpunten van bindweefsel, er ontwikkelt zich fibrose.

Met de ontwikkeling van leverfibrose in staat is zijn functie uit te voeren, begint cirrose, die gevaarlijk zijn voor de complicaties ervan is: het verhogen van de druk in de poortader, gastro-intestinale bloeden, verstoorde bloedstolling, mentale veranderingen als gevolg van de hersenen kernen toxische producten beschadigen.

De oorzaak van de ziekte is infectie met een virus uit de Flaviviridae-familie, een soort RNA-virus. Dit betekent dat het genetische materiaal waarmee eiwitten van de pathogeen worden gesynthetiseerd wordt gecodeerd in een molecuul van ribonucleïnezuur. Infectie gebeurt door het bloed, seksueel, en van een zwangere vrouw naar de foetus. Helaas kan tussen infectie en het begin van de productie van antilichamen een vrij grote hoeveelheid tijd verstrijken - van twee weken tot zes maanden. Dit laat niet toe om de infectie te bepalen met de methode van enzymimmunoassay en start de behandeling in de vroege stadia.

Wat is PCR-analyse?

PCR is een methode voor moleculaire analyse waarmee het genetische materiaal van het pathogeen al in de eerste week na infectie kan worden gedetecteerd met behulp van een polymerasekettingreactie. De studie heeft een hoge specificiteit en nauwkeurigheid en maakt het niet alleen mogelijk de aanwezigheid of afwezigheid van het virus te bepalen, maar ook de concentratie en het genotype.

Neem voor de studie het bloed van de patiënt, waarin het RNA van het virus mogelijk kan worden gevonden. In het bloed worden primers toegevoegd - kunstmatig gesynthetiseerde delen van het gewenste gen van kleine lengte, en RNA-polymerase is een speciaal enzym dat de hoeveelheid genetisch materiaal van het pathogeen vermenigvuldigt. Met behulp van een speciaal apparaat worden verschillende cycli van verwarmen en koelen uitgevoerd. Het materiaal wordt vervolgens geanalyseerd en vergeleken met bekende virusgenen, op basis waarvan een conclusie wordt getrokken over de aan- of afwezigheid van een infectie.

Typen PCR-analyse voor hepatitis C

Er zijn drie soorten PCR-analyse:

  1. Kwalitatieve PCR-analyse. De eerste fase van het onderzoek. Hiermee kunt u het genetisch materiaal van het virus in het bloed identificeren.

  • Kwantitatieve analyse van PCR. Hiermee kan de virale last worden bepaald - de concentratie van het genetisch materiaal van de ziekteverwekker in één milliliter bloed. Deze studie wordt uitgevoerd vóór het begin van de therapie en vervolgens op de eerste, vierde, twaalfde en (als de cursus lang duurt) de vierentwintig week van de behandeling om de effectiviteit ervan te evalueren.

  • genotypering. De veroorzaker van hepatitis C muteert vaak en snel. Op de planeet werden zeven varianten van het genotype van dit virus gevonden. In Rusland zijn het eerste, tweede en derde type gebruikelijk. Elk van de genotypes heeft verschillende weerstand tegen therapie, bijvoorbeeld, de effectiviteit van de behandeling van het eerste type is zestig procent, en voor het tweede en derde deel bereikt het vijfentachtig. Daarom is het, om geschikte geneesmiddelen te selecteren en een behandelingsduur van voldoende duur voor te schrijven, nodig om exact te bepalen met welk type virus de patiënt is geïnfecteerd.
  • Indicaties voor PCR-analyse voor hepatitis C

    PCR-onderzoek wordt voorgeschreven in de volgende gevallen:

    • contact met een zieke persoon, die tot infectie kan leiden;
    • positieve enzymgekoppelde immunoassay;
    • verschijnselen van levercirrose: veranderingen in levergrootte, vergrote milt, verschijning van subcutane veneuze plexus op de buik;
    • het optreden van symptomen van leverschade: pijn in de rechterkant van de buik, gele verkleuring van de huid;
    • verhoogde activiteit van ALT en AST in biochemische bloedanalyse;
    • voordat de behandeling wordt gestart om de virale lading te bepalen;
    • om de effectiviteit van antivirale therapie te controleren;
    • na voltooiing van de behandeling om terugval te volgen;
    • in aanwezigheid van gediagnosticeerde hepatitis B, om gemengde leverschade uit te sluiten.

    Decodering van PCR-studie voor hepatitis C

    Decodering van PCR-analyse en enzymimmunoassay voor hepatitis C dient te worden geadresseerd door een hepatoloog of specialist in besmettelijke ziekten. Analyse van de resultaten van PCR is noodzakelijk in combinatie met biochemisch bloedonderzoek, biopsie en echografie. Alleen een gekwalificeerde arts kan de resultaten van de onderzoeken analyseren en op basis daarvan de juiste behandeling voorschrijven.

    Decodering van kwalitatieve analyse.

    Het genetische materiaal van het pathogeen werd gevonden in het geanalyseerde biologische materiaal. Infectie is bevestigd.

    Er is geen infectie of de hoeveelheid RNA van het pathogeen ligt onder de gevoeligheidslimiet.

    Decodering van kwantitatieve analyse.

    Een normaal cijfer voor gezonde mensen. Het betekent dat er geen hepatitis C-RNA in het testmateriaal zit of dat de concentratie onder de gevoeligheidsdrempel van het onderzoek ligt.

    Concentratie van RNA ligt onder het bereik van kwantificering. Dergelijke resultaten worden zeer voorzichtig geïnterpreteerd, correleren ze met de gegevens van andere onderzoeken en voeren vaak een tweede onderzoek uit.

    Het niveau van virale lading bij een gegeven concentratie wordt als laag beschouwd. Gewoonlijk betekent een afname van de hoeveelheid virus dat de therapie succesvol is.

    Meer dan 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Het niveau van virale lading bij een gegeven concentratie wordt als hoog beschouwd.

    Meer dan 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    De hoeveelheid RNA ligt boven de bovengrens van het kwantificeringsbereik. Doe met dit resultaat geen conclusies over de mate van virale lading. Meestal wordt in dergelijke gevallen de test herhaald met de verdunning van het bloedmonster.

    Decoderen van genotypering.

    RNA van een specifiek genotype werd gedetecteerd

    In het biomateriaal wordt hepatitis C-virus van een specifiek genotype en subtype gedetecteerd. Het resultaat is gecodeerd in Romeinse cijfers en Latijnse letters, bijvoorbeeld - 1a, 2b. Er zijn zeven genotypes en zevenenzestig subtypen, maar in Rusland zijn er maar drie eerste typen.

    Hepatitis C-virus-RNA werd gedetecteerd

    In het bloed is RNA een zeldzaam genotype voor Rusland gevonden, dat niet kan worden toegeschreven aan het eerste, tweede of derde type. Meer onderzoek is nodig.

    Dit resultaat geeft aan dat de patiënt gezond is of dat het RNA-niveau van het pathogeen te klein is.

    Een situatie is mogelijk wanneer de PCR-analyse voor hepatitis C negatief is en de enzymimmuuntest antilichamen tegen het virus detecteert. Dit betekent dat de patiënt hepatitis C in acute vorm heeft gehad en zichzelf heeft genezen. Ongeveer twintig gevallen van infectie resulteren in spontane genezing als het lichaam van de patiënt voldoende weerstand tegen infectie uitoefent.

    Ondanks het feit dat PCR een zeer nauwkeurige analyse is, kunnen de resultaten daarvan in de volgende situaties worden vervormd:

    • bloed werd onder ontoereikende omstandigheden naar het laboratorium getransporteerd, het temperatuurregime werd geschonden;
    • het monster van het biomateriaal was verontreinigd;
    • in het bloed waren er restsporen van heparine en andere anticoagulantia;
    • In de onderzochte stof waren remmers - stoffen die de polymerasekettingreactie vertragen of stoppen.

    Voordelen van PCR ten opzichte van andere methoden

    1. Diagnose in de vroege stadia. PCR detecteert het genetische materiaal van de veroorzaker van de ziekte. Met behulp van immunofluorescentieanalyse is het mogelijk om alleen immunoglobulines te bepalen - stoffen die het lichaam produceert als reactie op een infectie. In het geval van hepatitis C-infectie kan het interval tussen infectie en het begin van een immuunrespons enkele weken en maanden zijn, op welk moment ELISA niet effectief zal zijn. PCR geeft al een antwoord in de eerste week na infectie.

  • Lage kans op fouten. In het bestudeerde materiaal wordt het genetische materiaal bepaald, dat alleen kenmerkend is voor één type pathogenen. Hiermee kunt u valse resultaten uitsluiten. Met ELISA zijn fouten mogelijk, omdat dezelfde soort antilichamen kunnen worden vrijgegeven tegen verschillende virussen - dergelijke antilichamen worden kruisreactief genoemd.

  • Hoge gevoeligheid. PCR kan RNA van het pathogeen zelfs in minimale hoeveelheden detecteren. Dit maakt het mogelijk om verborgen infecties te identificeren.
  • Voorbereiding op bloedafgifte voor PCR-onderzoek

    Voor PCR-analyse wordt veneus bloed verzameld voor hepatitis C. Gewoonlijk worden twee delen bloed onmiddellijk uit de ader van de patiënt genomen: de eerste wordt verzonden voor PCR en de tweede voor ELISA. Dit wordt gedaan om nauwkeuriger te kunnen beoordelen hoe ernstig de patiënt is geïnfecteerd met het virus en hoe de immuniteit hiertegen vecht.

    Meestal zijn de volgende regels van de patiënt vereist:

    • een bloedtest wordt 's morgens afgenomen;
    • de pauze tussen de laatste maaltijd en de aflevering van bloed moet acht tot tien uur zijn;
    • twee of drie dagen voor de analyse moet je gefrituurd en vet voedsel en alcohol opgeven;
    • vierentwintig uur vóór de analyse moet de patiënt fysieke inspanning vermijden: draag geen gewichten, ga niet naar een sportschool of zwembad.

    Kwalitatieve analyse voor hepatitis C

    Laat een reactie achter

    Kwalitatieve analyse van polymerasekettingreactie - PCR voor hepatitis C bepaalt de aanwezigheid of afwezigheid van HCV in het lichaam. In het laboratorium wordt de structuur van het RNA bestudeerd, waarin het virus zich zal bevinden. Als een virus C wordt gedetecteerd, is het noodzakelijk om een ​​behandeling te ondergaan, omdat een verwaarloosde leveraandoening ernstige gevolgen heeft. Kwalitatieve PCR wordt uitgevoerd na herstel om de afwezigheid van antilichamen te bevestigen. Benoemd en voor preventief onderzoek. Bij een lage concentratie van het pathogeen in het bloed kan PCR (kwalitatief) niets detecteren, omdat het diagnosesysteem zijn gevoeligheidsdrempels heeft. In het geval van een eerste stadium van de ziekte of een milde vorm, wordt de PCR uiteindelijk gediagnosticeerd met ultragevoelige apparatuur.

    Wat is een RNA-virus?

    De term RNA van hepatitis C-virus (of hepatitis C-virus-RNA) wordt zelf leverziekte genoemd. Virus C bindt zich aan een gezonde lichaamscel en dringt binnen. Na verloop van tijd, verspreid door het lichaam, is het alleen om in het bloed te komen. Het gevolg is dat de ziekteverwekker de lever binnendringt, zich vermengt met zijn cellen en hard werkt. Levercellen (hepatocyten) werken onder zijn invloed, ondergaan veranderingen en gaan ten onder. Hoe langer het virus C in de lever zit, hoe meer cellen afsterven. Na verloop van tijd ontwikkelen zich gevaarlijke ziektes die leiden tot kwaadaardige degeneratie en dood.

    Infectie van de lever met dit type virus kan op geen enkele manier extern worden gemanifesteerd. Gedurende vele of tientallen jaren voelt de geïnfecteerde persoon zich volledig gezond en alleen een onderzoek per ongeluk onthult meestal een pathologie. Bij het doneren van bloed voor hepatitis wordt een deel van de RNA (ribonucleïnezuur) keten die deel uitmaakt van het menselijke gen (DNA) onderzocht. De resultaten van laboratoriumonderzoek mogen niet worden gebruikt voor zelfbehandeling, omdat dit slechts een indicator is. De arts zal het exacte beeld en de verdere diagnose bepalen.

    Wanneer gedaan: getuigenis van de studie

    Om de HCV te bevestigen, wordt PCR-analyse (polymerasekettingreactie) toegewezen. PCR-onderzoeken helpen bij het vinden van het pathogeenmateriaal in de RNA-structuur en schrijven effectieve therapie voor. Benoemd in de volgende gevallen:

    • identificatie van tekenen van leverontsteking;
    • screeningstudies voor preventie;
    • onderzoek van contactpersonen;
    • diagnose van hepatitis van gemengde oorsprong (definitie van de belangrijkste ziekteverwekker);
    • Bepaling van het niveau van activiteit van virusreproductie in chronische vorm;
    • cirrose van de lever;
    • om de effectiviteit van de voorgeschreven behandeling te bepalen.
    PCR-onderzoeken worden door een arts toegewezen om de effectiviteit van het verloop van de behandeling van hepatitis te bepalen.

    Er is zowel een kwalitatieve als een kwantitatieve analyse van PCR. Kwantitatieve PCR toont het percentage RNA met de dragers van het virus in het bloed en de kwalitatieve PCR geeft een virale aanwezigheid of afwezigheid aan. Een positieve indicator van kwaliteit (de aanwezigheid van hepatitis C-RNA) vereist ook een kwantitatief onderzoek. Een hoog concentratieniveau van de pathogeen van hepatitis C hangt samen met het risico van overdracht, dat wil zeggen besmetting van anderen. Lage hoeveelheden worden beter behandeld. De hoeveelheid RNA-virussen in het bloed is niet gerelateerd aan de intensiteit van de ziekte. De PCR-analyse wordt ook uitgevoerd in het geval van interferon-therapie, om de duur en de complexiteit van de behandelingskuur voor te schrijven.

    Kenmerken van kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C

    Een kwalitatieve analyse met een polymerasekettingreactie-index wordt toegekend aan alle patiënten die antilichamen tegen hepatitis C in hun bloed hebben. Wie hersteld en hersteld is, moet opnieuw worden getest. Aanbevolen wordt om getest voor hepatitis B en vervolgens, bij een positieve afsluiting, en hepatitis D ook kwalitatief geanalyseerd reakatsiya dient in samenhang met andere bloedonderzoeken worden uitgevoerd. Analyses zullen een compleet beeld geven van de virusverspreiding.

    Uit de testresultaten zal alleen een positieve test voor hepatitis C of negatief, dat wil zeggen de aanwezigheid of afwezigheid van het virus, worden gezien. Als de conclusie "wordt gedetecteerd", is en blijft het virus actief acteren. De aanduiding "niet gevonden" geeft de afwezigheid van het virus of de kleine hoeveelheid aan. Met deze indicator moet rekening worden gehouden met het feit dat de analytische gevoeligheid van diagnostische systemen anders is en dat RNA-hepatitis C nog steeds in het bloed kan zijn, maar niet in de analyse kan voorkomen.

    Een bijzonder gevoelige methode van PCR ultra-hepatitis C onthult zelfs in kleine hoeveelheden. Een hybridisatie-fluorescente studie wordt gebruikt die vele malen hoger is dan standaard PCR-systemen. De methode wordt in verschillende gevallen gebruikt:

    • verdachte verborgen vormen van hepatitis C;
    • De diagnose van PCR werd niet bevestigd door het pathogeen, maar er zijn antilichamen;
    • in geval van herstel;
    • om het vroege stadium van infectie te identificeren.
    Terug naar inhoud

    Toelichting op de analyse

    De uiteindelijke beslissing in de diagnose wordt beïnvloed door PCR-decodering van HCV, in het bijzonder met ultramethode. Het belangrijkste nadeel van dit onderzoek is de strikte naleving van steriele omstandigheden voor het monster en de materialen. Een kleine afwijking vertoont soms onnauwkeurige conclusies van de analist, compliceert de diagnose en daaropvolgende behandeling. Analyse van PCR voor de bepaling van RNA van hepatitisvirus toont niet altijd het beeld van de ziekte met vertrouwen, soms worden onnauwkeurigheden toegelaten, op beide manieren.

    Bij het diagnosticeren van het hepatitis-virus wordt aanbevolen een uitgebreid onderzoek uit te voeren.

    Norm van indicatoren

    De afwezigheid van JgM-antilichamen tegen RNA bij virale hepatitis C wordt beschouwd als de norm bij de analyse van de polymerasekettingreactie. Tegelijkertijd wijzen de bevindingen van serologische analyse op de aanwezigheid van antilichamen tegen het virus C en dit ligt ook binnen de grenzen van de norm. Een kwalitatieve definitie toont niet de intensiteit van de ziekte, het onthult alleen de veroorzaker van hepatitis C in RNA. Een dergelijke analyse wordt na de behandeling herhaald om het daadwerkelijke herstel te bevestigen.

    afwijkingen

    Als JgM-antilichamen tegen HCV-RNA aanwezig zijn, duidt dit op een zich ontwikkelende infectie. De ziekte is acuut of chronisch, manifesteert zich in verschillende stadia. Als een afname van het aantal antilichamen wordt geregistreerd, geeft de analyse aan dat de resultaten van de behandeling tijdens het herstel zijn behaald. Er zijn uiterst zeldzame gevallen van vals positieve bevindingen in de diagnose. Ze zijn te vinden bij vrouwen tijdens de zwangerschap en bij mensen met andere besmettelijke ziekten.


    Gerelateerde Artikelen Hepatitis