Analyse van PCR voor hepatitis C

Share Tweet Pin it

De diagnose van hepatitis omvat een heel complex van tests om de aanwezigheid van het virus in het bloed te bepalen. Een manier om een ​​ziekte te detecteren is door een methode zoals PCR te gebruiken voor hepatitis C. Wat is dit, waarom is PCR-analyse van hepatitis zo belangrijk, hoe wordt het uitgevoerd en gedecodeerd?

Wat is het?

Polymerase kettingreactie, of PCR, wordt gebruikt voor het diagnosticeren van maagzweren, colitis, enteritis. Maar het belangrijkste voordeel is dat het helpt om zowel het hepatitis C-virus zelf als antilichamen in het lichaam te detecteren, die het vermogen hebben om het immuunsysteem niet te laten reageren vanwege hun vermogen om te muteren.

De studie en zijn essentie zijn om bepaalde condities te creëren waaronder een hepatitis RNA-kettingreactie optreedt. Als, in vergelijking met de nucleotidensequentie van het hepatitis C-virus, toeval wordt gevonden, duidt dit erop dat er virale deeltjes in het bloed zijn en dat er afbraak plaatsvindt in de lever. Als de hoeveelheid virus onder een bepaald niveau is, wordt een negatieve diagnose gesteld, indien hoger - positief.

Er zijn twee soorten bloedtesten met behulp van de PCR-methode voor hepatitis: kwantitatieve analyse en kwalitatieve analyse.

De kwantitatieve PCR, zoals hierboven vermeld, bepaalt de concentratie van RNA van het hepatitisvirus. Daarnaast is het in staat om informatie te geven over de intensiteit waarmee de pathologie zich ontwikkelt en de effectiviteit van de voorgeschreven behandeling. De kwantitatieve analyse van hepatitis C is uitermate belangrijk, omdat het de weerstand tegen de werking van antivirale geneesmiddelen aanpast en de therapie kan aanpassen.

Nadat de patiënt een behandelingskuur heeft ondergaan, helpt PCR om de verdere volgorde van de recepten te bepalen. In sommige gevallen zijn aanvullende enquêtes nodig. Als het ALP-niveau bijvoorbeeld verhoogd is (maar niet meer dan 2 keer in een half jaar) en de analyse wijst op een virale last boven 105 IE / ml, krijgt de patiënt een biopsie toegewezen. Als de kwantitatieve analyse van PCR een sterke ontsteking en fibrose onthult, wordt aan de patiënt een behandelingskuur met antivirale geneesmiddelen voorgeschreven.

In situaties waarin een groot aantal virale deeltjes wordt gecombineerd met een hoge ALT, moet de patiënt onmiddellijk worden behandeld zonder aanvullende diagnostische maatregelen.

Doe deze test en ontdek of u leverproblemen heeft.

Kwalitatieve interpretatie van indicatoren voor kwantitatieve analyse van bloed voor hepatitis kan alleen gekwalificeerde en ervaren professionals zijn, en moderne technologie helpt dit bij lage concentraties van het virus in het bloed.

Kwalitatieve PCR-analyse is gericht op het bepalen en bevestigen van de daadwerkelijke aanwezigheid van het virus in het lichaam. Het wordt uitgevoerd met de detectie van antilichamen tegen hepatitis in het bloed. Het is een kwalitatieve test voor hepatitis garantie voor de juistheid van het resultaat met 100% en kunt u de diagnose in de vroege stadia van de ziekte, die het mogelijk maakt om de hepatitis B binnen de eerste weken te vechten na de besmetting en verhoogt de kans op volledig herstel (in het geval van type B ziekte).

Voordelen van PCR

Bij het onderzoeken van de PCR-methode en het ontcijferen van de bloedtest voor hepatitis, is het ook mogelijk om het genotype van de veroorzaker van de ziekte te bepalen. Er zijn 6 genotypes van het virus en een groot aantal subtypes, maar in onze regio, de verdeling van 1, 2 en 3 genotypes.

Andere voordelen van dit type diagnose zijn:

  • Hoge nauwkeurigheid van de ontvangen indicatoren en lage kans op fouten daarin;
  • hoge gevoeligheid voor virale deeltjes in het bloed;
  • de mogelijkheid om verschillende pathogenen te detecteren;
  • diagnostiek van pathogene intracellulaire micro-organismen met hoge antigene variabiliteit;
  • werk met het decoderen van de analyse van een hepatitis maakt het mogelijk om latente actuele infecties te ontdekken.

Aan wie benoemen

De analyse van PCR voor hepatitis omvat noodzakelijkerwijs de volgende categorieën mensen:

  • zwangere vrouwen;
  • werknemers van zorginstellingen;
  • potentiële donoren van bloed en organen;
  • degenen die de kenmerkende symptomen van de ziekte hebben;
  • HIV-geïnfecteerde personen;
  • drugsverslaafden;
  • personen die een promiscu seksleven leiden.

Hoe wordt de analyse uitgevoerd en is training vereist?

Bloedafname voor PCR wordt uitgevoerd vanuit de ader. Meestal gebeurt dit in de ochtend voordat de persoon at, omdat na het eten minimaal 8 uur moet worden gepasseerd. In extreme gevallen kan bloed overdag of 's avonds worden onderzocht, maar het tijdsverschil tussen analyse en voedselinname moet minstens 5 uur zijn.

De menselijke factor kan kwantitatief worden weerspiegeld in de resultaten: de nauwkeurigheid daalt in sommige gevallen van 100% tot 95%, daarom is het noodzakelijk om vooraf voorbereidingen te treffen voor de bloedlevering. De kwaliteit van het biomateriaal voor analyse zal geschikt zijn wanneer de patiënt de volgende regels volgt:

  • Voordat je bloed geeft, mag je alleen zuiver water drinken;
  • gedurende twee dagen vóór het onderzoek moet worden geweigerd van de inname van gefrituurd en vet voedsel, evenals alcoholische dranken;
  • een dag voor het bezoek aan het laboratorium moet stoppen met het nemen van medicatie. Als dit niet mogelijk is, is het absoluut noodzakelijk om de laboratoriumassistent en de behandelende arts hierover te waarschuwen;
  • aan de vooravond van stressvolle situaties en fysieke inspanning;
  • Ga niet door echografie, radiologie en instrumentale studies kort voor bloeddonatie;
  • een uur voordat de analyse moet stoppen met roken;
  • 20 minuten voordat de bloedafgifte moet worden afgeleid, kalmeren en zelfs ademen.

Als de test wordt uitgevoerd door een kind jonger dan 5 jaar, moeten ouders ervoor zorgen dat ze gedurende een half uur om de 10 minuten water drinken voordat het biomateriaal wordt bemonsterd.

Toelichting op ontvangen gegevens

De analyse kan in woorden worden gepresenteerd (in geval van kwalitatief onderzoek), bijvoorbeeld 'niet gevonden' of 'onder het bereik van wijzigingen'. In het eerste geval geeft dit aan dat de infectie niet is gedetecteerd. In de tweede - dat het virus aanwezig is, maar in een kleine hoeveelheid. Deze situatie vereist een nieuw onderzoek.

Virale belasting wordt bepaald door de hoeveelheid infectueus RNA en wordt aangegeven als ME / ml of kopieën / ml.

De normale indicator (norm) van de kwantitatieve analyse voor hepatitis C is het bereik van 1,8x102 tot 2,4x107 IE / ml.

De concentratie van het virus in het bloed kan zijn:

  • laag: van 600 IU / ml tot 3x10 4 / ml;
  • gemiddelde: van 3х10 4 IU / ml tot 8х10 5 IU / ml;
  • hoog: meer dan 8х10 5 IE / ml.

Kwantitatieve en kwalitatieve analyse van PCR voor hepatitis maakt het mogelijk de aanwezigheid van het virus in het lichaam en de concentratie te bepalen. Polirazmernaya kettingreactie in staat om de diagnose van de ziekte in een vroeg stadium, maar het is noodzakelijk om patiënten zo snel mogelijk in medische instellingen om hulp behandeld en strikt volgde de aanbevelingen van de behandelend arts.

PCR-diagnostiek gebruiken

Polymerase-kettingreactie (PCR) in de moleculaire biologie wordt de experimentele methode voor virusdetectie genoemd. Het maakt het mogelijk om de concentratie van bepaalde fragmenten van nucleïnezuur (DNA) in monsters van biologisch materiaal aanzienlijk te verhogen, wat het mogelijk maakt ze te bepalen (herkennen) en te tellen.

De analyse wordt als volgt uitgevoerd. Genetisch materiaal (een bloedmonster), dat mogelijk het gewenste gen kan bevatten, wordt in een reageerbuis ingebracht. Ook daar worden primers geplaatst - chemisch gesynthetiseerde kleine lengten van het gewenste gen.

Het DNA- of RNA-polymerase wordt ook aan het vat toegevoegd, het is in staat om een ​​nucleïnezuurketen te bouwen die volledig identiek is aan de oorspronkelijke. Een reeks van vier vrije nucleotiden, een speciaal bouwmateriaal voor RNA of DNA, waarvan er één radioactieve deeltjes van fosfor bevat, wordt ook in de resulterende samenstelling ingebracht.

Het resulterende mengsel wordt verwarmd tot 95-96 ° C, waardoor de twee DNA-helices, die in de gebruikelijke toestand zijn verweven, worden ontrafeld. Vervolgens wordt het preparaat gekoeld, op dit moment hechten de primers zich aan het gewenste gebied van het virusgenoom, zonder toe te staan ​​dat RNA (of DNA) opnieuw een dubbele helix vormt.

Tijdens het afkoelen zoekt het polymerase naar een vrije keten van nucleotiden. Voor de werking van dit enzym is een enkele keten van nucleotiden nodig. Omdat het polymerase langs de DNA-streng slipt (zoals een ring met een touw), kan het niet werken op een dubbele helix.

Hierna wordt een herhaalde verwarmingscyclus uitgevoerd, waardoor de nucleotide-ketens worden gescheiden. Voor elk van deze PCR-cycli neemt de hoeveelheid van het gewenste hepatitis-gen in het monster toe in een geometrische progressie, en de rest van het genetische materiaal wordt lineair geproduceerd.

Na het zuiveren van de oplossing van de nucleotide-residuen en het scheiden van de DNA-strengen door de molecuulgewichtsparameter van de elektroforese, is het gemakkelijk om te bepalen of het gewenste gen in het testmonster aanwezig is of niet.

Voordelen van PCR

Een laboratoriumonderzoek met behulp van de PCR-methode maakt het mogelijk om nog meer informatie te verkrijgen dan alleen de aanwezigheid van het RNA-virus. Bij het bepalen van de parameter van het niveau van radioactieve straling, is het mogelijk om te bepalen welke hoeveelheid genetisch materiaal aanvankelijk in het onderzochte monster aanwezig was. Stel in geval van hepatitis het niveau van de virale lading vast.

Een ander voordeel van deze methode is de zeer hoge gevoeligheid van de CR-reactie. Het is veel hoger dan de klassieke methoden voor het detecteren van virussen. In het ideale geval is, om het gewenste gen te identificeren, slechts één virus in het monster voldoende voor PCR.

Bovendien is PCR volledig specifiek. De primers zijn zo gemaakt dat ze volledig overeenkomen met de unieke delen van de gewenste genen, die geen enkele andere sequentie heeft. Beide vingerafdrukken zijn uniek en in elk gen zijn er unieke sequenties van nucleotiden.

Kwalitatieve PCR-analyse

Kwalitatieve analyse onthult alleen de aanwezigheid van een virus in het bloed. Deze test moet worden uitgevoerd voor alle patiënten waarvan is vastgesteld dat ze antilichamen tegen hepatitis C in hun bloed hebben Het resultaat kan slechts één van de twee waarden zijn: "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd". Bij een gezond persoon moet de norm (referentiewaarde) "niet gedetecteerd" worden.

Er is ook een speciale interpretatie van dergelijke resultaten van het uitgevoerde kwalitatieve onderzoek:

  • Het resultaat is "ontdekt". Dit betekent dat het monster van biologisch materiaal die werd gevonden door een RNA-fragment dat specifiek is voor het hepatitis C-virus Bijgevolg is het feit van de patiënt met hepatitis B virusinfectie bij C. Indien het resultaat van de kwalitatieve PCR "ontdekt", betekent dit dat het virus repliceert en op dit moment infecteert het nieuwe levercellen in het lichaam.
  • Het resultaat is "niet gedetecteerd". Dergelijke uitspraak geeft aan dat in het monster van biologisch materiaal verkregen RNA-fragment wordt niet gedetecteerd in het laboratorium, dat specifiek is voor hetzij HCV RNA dezelfde concentratie van het pathogeen infectie in het monster was beneden de gevoeligheid van de test.

In de acute fase van het hepatitis C-virus-RNA kunnen kwalitatieve onderzoeken met behulp van de PCR-techniek na 1-2 weken onmiddellijk na infectie van het lichaam worden aangetoond, dat wil zeggen lang voordat antilichamen tegen de hepatitis zelf verschijnen.

Onbetrouwbare resultaten van analyses van een dergelijk onderzoek kunnen worden verkregen met:

  • besmet biomateriaal;
  • aanwezigheid van heparine in het bloed van de patiënt;
  • aanwezigheid in het monster van chemische of eiwitstoffen (remmers) die verschillende componenten van PCR beïnvloeden.

Voor de kwalitatieve analyse van PCR is een speciale voorbereiding van de patiënt voor het onderzoek niet vereist. Veneus bloed wordt als materiaal gebruikt.

Evaluatie van resultaten

Kwalitatieve PCR-tests hebben een zekere gevoeligheid, en afhankelijk van de nauwkeurigheid van het onderzoek, kan het niveau van apparatuur in het laboratorium variëren van 10 tot 500 IE / ml.

Dit betekent dat als het virus in het bloedmonster aanwezig is in een zeer lage concentratie (minder dan de gevoeligheidsdrempel van het gegeven laboratorium), de patiëntpatiënt kan worden bepaald als "niet gedetecteerd". Hierdoor wanneer zij de kwalitatieve analyse van PCR met lage viremie (virus lage concentratie), bijvoorbeeld voor patiënten die behandeling van antivirale therapie, is het belangrijk te weten, en de drempelwaarde van de gevoeligheid van het diagnosesysteem.

Varianten van diagnostische systemen

Om de virologische respons te controleren, wordt antivirale behandeling aanbevolen voor het gebruik van diagnostische systemen met een sensitiviteitsdrempel van ten minste 50 IE / ml. Deze voorwaarden wordt voldaan, bijvoorbeeld: analysatoren Cobas Ampicolor HCV Test (c nauwkeurigheid van 50 IU / ml) en RealBest HCV RNA (met een gevoeligheid van 15 IU / ml).

Volgens de WHO voor het vaststellen van een definitieve diagnose van hepatitis C moet berusten op basis van drievoudige detectie van RNA virus in serummonsters van een patiënt zonder andere soorten hepatitis marker.

Naast PCR-methoden wordt ook een TMA-onderzoek (transcriptionele amplificatiemethode) gebruikt om HCV-RNA bij patiënten te detecteren. Het heeft de beste gevoeligheidsdrempel (5-10 IE / ml), maar in ons land is deze testmethode nog niet heel gebruikelijk.

Het bereik van gedetecteerde wijzigingen van virussen

Deze kwalitatieve bepaling in het serum van de aanwezigheid van RNA van hepatitis C-virus maakt het mogelijk om verschillende genotypen van dit virus te bepalen. Momenteel kent de wetenschap meer dan zes genotypen van dit virus, evenals ongeveer 10 subtypen van de ziekte.

Virussen van 1, 2, 3 genotypen komen vaak voor in ons land. Laboratoria kunnen de volgende genotypen identificeren: 1a en 1b, 2a, 2b en 2c, en 3, 4, 5a en 6, ongeacht subtypes. Voor alle virusmodificaties is de specificiteit van de detectie 100%.

Kwantitatieve analyse van PCR

Met behulp van een kwantitatieve PCR-test wordt het niveau van de hepatitis-virusconcentratie in bloedmonsters bepaald (virale lading). Met deze test voor viremie (de concentratie van het virus) kunt u het aantal eenheden bepalen van een specifiek genetisch materiaal (het meest virale RNA), dat in een bepaalde hoeveelheid wordt gedetecteerd. Bepaal in dit geval de concentratie in 1 ml, wat overeenkomt met 1 cu. cm.

De kwantitatieve parameters van de analyse zijn uitgedrukt in cijfers, voor dit gebruik als maateenheid internationale eenheden (IU) per milliliter (ml), aangegeven als ME / ml. Nu kan in sommige laboratoria de hoeveelheid van het virus in andere eenheden worden bepaald: het aantal kopieën per ml wordt aangeduid als kopieën / ml.

  • Timing Voor hepatitis C wordt een dergelijke kwantitatieve analyse van PCR uitgevoerd net voor het begin van de therapie. Dan op de 1e, 4e, 12e en 24e week. Evaluatie op de 12e week is indicatief, het maakt het mogelijk om de effectiviteit van de therapie te bepalen.
  • Voorbereiding voor analyse. Voor de kwantitatieve analyse van PCR is een speciale voorbereiding van de patiënt voor het onderzoek niet vereist. Een half uur voor het nemen van monsters mag u niet roken. Veneus bloed wordt gebruikt als laboratoriummateriaal.

Evaluatie van resultaten

Voor verschillende laboratoriumtestsystemen zijn er verschillende conversiefactoren voor deze indicator in IE / ml. Gemiddeld wordt een conversieparameter gebruikt, waarbij 4 kopieën / ml = 1 IU / ml. Dat is bijvoorbeeld het geval als het laboratorium het resultaat van PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopieën / ml geeft, dan moet deze parameter worden gedeeld door 4 en krijgen we 6 * 10 5 IU / ml.

Een hoog ladingsniveau van 800.000 IU / ml wordt als hoog beschouwd, wat ongeveer equivalent is aan een index van 3.000.000 kopieën / ml. Lage viremie komt, volgens sommige auteurs, overeen met de parameters van kwantitatieve PCR lager dan 400.000 IU / ml.

Als resultaat van de kwantitatieve test kunnen de eindresultaten niet in de vorm van een digitale waarde worden geleverd, maar: "onder het meetbereik" of "niet gedetecteerd".

  • Evaluatie: "onder het meetbereik". Dit geeft aan dat de kwantitatieve test geen hepatitis C-viraal RNA kon detecteren, maar het virus zelf is in zeer kleine concentraties in het lichaam aanwezig. Dit wordt aangegeven door een aanvullende kwalitatieve test, die het feit van de aanwezigheid van het virus bevestigt.
  • Evaluatie: "niet gedetecteerd". Dit resultaat geeft aan dat de kwantitatieve test geen virus in het RNA-monster detecteerde.

De parameter van de virale lading, in de eerste plaats, bepaalt de mate van infectiviteit van de ziekte, het niveau van "infectiousness" van de patiënt. Hoe hoger de concentratie van het virus door de patiënt, hoe groter de kans dat het aan andere mensen wordt overgedragen. Bijvoorbeeld wanneer u seks hebt met een zieke persoon of een verticaal pad. Zo'n kwantitatieve indicator helpt ook om de effectiviteit van de behandeling van de patiënt te bepalen.

Het uitvoeren van een kwantitatieve analyse van PCC is belangrijk voor antivirale therapie, het evalueren van het succes ervan en het plannen van de duur van de cursus. Dus, met de snelle reactie van het lichaam op de behandeling en een lage graad van viremie, kan de duur van de therapie worden verminderd.

Met een langzame afname van de kwantitatieve PCR-parameter moet antivirale therapie worden uitgebreid of aangepast. Als het niveau van de virale last laag is, dan is dit een gunstige factor van de therapie, als deze hoog is, dan is de toegepaste behandelmethode niet effectief en moeten geneesmiddelen of methoden voor het gebruik ervan worden gewijzigd.

Diagnose met PCR voor hepatitis C

Niet iedereen weet, dat PCR diagnostische methode te gebruiken voor hepatitis C. Een van de meest voorkomende groepen ziekten zijn besmettelijke ziekten van het maag-darmkanaal. Meestal lijden aan maag (zweren), darmen (colitis, enteritis) en lever (hepatitis).

Op de lever van alle bovengenoemde organen wordt de grootste belasting toegewezen. In het lichaam is de rol van de lever uiterst belangrijk:

  1. Bijna alle metabolische reacties komen voor in de lever (hier worden alle vitale componenten die het lichaam in staat stellen volledig te laten functioneren) gevormd.
  2. De lever is het belangrijkste orgaan dat de ontgiftingsfunctie uitvoert. Met zijn hulp (in het bijzonder door middel van gal) worden veel substraten verwijderd die vergiftiging kunnen veroorzaken en ernstige gevolgen kunnen hebben.

Helaas volgen veel mensen hun gezondheid niet, vanwege wat de lever begint te krijgen. Meestal ontwikkelt hepatitis van verschillende etiologie (viraal, toxisch).

Definitie van hepatitis

Virale hepatitis neemt een belangrijke plaats in bij leveraandoeningen. De ernst van het verloop van de ziekte, de complexiteit van de behandeling, maken hen de eerste onder pathologieën van een andere aard van dit orgaan.

Alle hepatitis is verdeeld in acuut en chronisch. Aan acute carry hepatitis A en B. Onder de chronische op de eerste plaats is hepatitis C.

De ziekte wordt veroorzaakt door het hepatitis C. Kenmerkend is dat de ziekte kan optreden gedurende lange tijd geen klinische verschijnselen.

Het wordt voornamelijk door het bloed overgedragen. Met de bloedstroom komt het virus de lever binnen, waar het zich begint te vermenigvuldigen in zijn cellen. Als gevolg van accumulatie van virionen treedt vernietiging van de geïnfecteerde hepatocyt op. Als reactie, beginnen antilichamen die de resten van hepatocyten beginnen aan te vallen. Hierdoor wordt in de loop van de tijd een poel gebouwd tegen de levercellen, wat het verloop van de ziekte verergert.

Vanwege het feit dat de ziekte is malosimptomno of asymptomatisch, en de klinische symptomen verschijnen alleen wanneer aanzienlijke celbeschadiging, deze ziekte vereist de creatie van diagnostische methoden om zijn aanwezigheid op te sporen en passende maatregelen nemen.

Diagnose van hepatitis C: kwalitatieve en kwantitatieve analyses

Op dit moment worden methoden zoals hepatische biopsie en immunogram gebruikt om hepatitis C te diagnosticeren.

Ze laten de aanwezigheid van geïnfecteerde hepatocyten (studie lever biopsie) of specifieke antilichamen tegen geïnfecteerde cellen (immunogram) direct te bepalen. Er is echter een methode die op betrouwbare wijze de aanwezigheid van het virus zelf kan bepalen. Deze PCR is een polymerasekettingreactie.

De essentie van deze methode ligt in het feit dat onder bepaalde omstandigheden de ontwikkeling van RNA-ketens plaatsvindt. Dit komt door het feit dat er fragmenten van het virusdeeltje in het bloed of in het biopsiemonster zitten. Wanneer ze worden gecombineerd met enkele moleculen in het medium, vindt de synthese van ketens complementair aan het virale RNA plaats. In de latere analyse en vergelijking met bekende nucleotidesequentie van HCV kunnen worden geïdentificeerd of er het virus in het lichaam of de leverschade aanwezig is.

PCR wordt uitgevoerd na de detectie van specifieke antilichamen tegen het hepatitis-virus in het bloed. Na de test wordt het resultaat weergegeven - RNA "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd". Af en toe kan hij zeggen "niet genoeg materiaal" - in dit geval een herhaalde analyse van hepatitis C.

Indien het aantal virale partikels kleiner is dan het vereiste minimum is, dan kunnen we spreken over het feit dat hepatitis B niet aanwezig is en de minimale hoeveelheid genetisch materiaal kan worden "verward" vanwege mimicry van het genetisch materiaal, of een sequentie van nucleotiden die kans zou kunnen samenvallen met die van het virus.

  1. Bij PCR kan een negatief resultaat worden waargenomen wanneer er in feite virale deeltjes in het bloed zijn, maar deze zijn zo klein (infectie is recent opgetreden of de analyse is voorafgegaan door een lange en intensieve antivirale therapie) dat het testsysteem eenvoudig hun concentratie niet normaal kon bepalen. RNA - "niet gedetecteerd".
  2. Als PCR een positief resultaat heeft, dan zijn er zoveel virusdeeltjes in het bloed dat hun aantal de onderste drempel van de gevoeligheid van het testsysteem overschrijdt. In dit geval is het risico van het ontwikkelen van een infectieus proces hoog (of het is al aanwezig in een redelijk verwaarloosde fase). Gewoonlijk is een hoge hoeveelheid van het virus al een indicatie voor behandeling en daaropvolgende levertransplantatie.

Soms kan de test vals-positief of fout-negatief worden.

Een vals-negatief resultaat van hepatitis PCR wordt waargenomen wanneer er enkele componenten in het reactiemedium zijn die de vorming van kopieën van het virusdeeltje remmen. Hierdoor is het niet mogelijk om een ​​getrouw beeld te krijgen van de bloedtoestand, wat bijdraagt ​​aan de passage van het virus en de progressie van de ziekte. De reactie kan worden beïnvloed door de aanwezigheid van heparine in het bloed (als gevolg van een afname van de relatieve viscositeit van het bloed). Een onjuiste interpretatie van de analyse is ook mogelijk wanneer niet aan de voorwaarden voor het transport en de opslag van het testmateriaal is voldaan.

Valse positieve resultaten, wanneer hepatitis C wordt gediagnosticeerd, wordt PCR meestal gegeven wanneer de reageerbuis of het werkmedium is besmet. Bovendien kunnen positieve resultaten worden waargenomen in de aanwezigheid en virussen van hepatitis van andere groepen (als gevolg van kruisreacties).

Kwalitatieve analyse van PCR voor de detectie van hepatitis C

De aanwezigheid in het bloed van een groot aantal cryoglobulinen heeft ook rechtstreeks invloed op het gedrag van PCR. Daarom is het voor de analyse van hepatitis C nodig om in het bloed hun concentratie te bepalen, om de vervorming van het resultaat van tevoren te detecteren en te voorkomen.

Na het uitvoeren van de gespecificeerde testen wordt duidelijk of er bloedvirusdeeltjes aanwezig zijn. Wanneer ze zijn gedefinieerd, wordt het aanbevolen onmiddellijk met antivirale therapie te beginnen om de voortgang van het proces te vertragen. In tegenstelling tot hepatitis B is er geen volledige genezing voor hepatitis C; de ziekte passeert alleen in een latent stadium en begint langzamer te stromen. Het verliezen van de lever is onvermijdelijk. In de laatste fase van het proces, wanneer de lever niet meer goed functioneert, moet deze mogelijk worden getransplanteerd.

De behandeling wordt hoofdzakelijk uitgevoerd met twee geneesmiddelen - interferon en ribavirine.

Hun effectiviteit in het vertragen van het proces van laesie van hepatocyten is bewezen. In de tussentijd is het noodzakelijk om infusietherapie toe te dienen om het werk van de lever te vergemakkelijken.

Alle patiënten die een toename van het aantal virusdeeltjes in het bloed hebben gezien, zijn noodzakelijkerwijs op de rekening van de hepatoloog. Meerdere malen per jaar wordt geadviseerd om een ​​preventief onderzoek te ondergaan om de voortgang van het proces en de tijdige detectie van indicaties voor transplantatie te bepalen. Bovendien kunt u hepatoprotectoren gebruiken, hoewel de meningen van artsen enigszins uiteenlopen. Sommigen geloven dat deze medicijnen het proces kunnen stoppen en de niet-genezen hepatocyten kunnen beschermen; Anderen zijn ervan overtuigd dat het geen zin heeft om ze te nemen en dat intensieve antivirale therapie moet worden uitgevoerd.

Hepatitis C behoort dus tot de categorie ziekten, waarvan de detectie enkele moeilijkheden oplevert. Verbetering van diagnostische methoden, evenals tijdige preventieve onderzoeken zullen de incidentie van deze ziekte verminderen. Het is ook belangrijk om deze ziekte te voorkomen. U moet zorgvuldig contact met bloed vermijden, weigeren om medicijnen te nemen, alleen dan zal deze ziekte worden uitgeroeid. Het belangrijkste in preventie en behandeling is de bewuste houding van de patiënt tegenover zijn gezondheid.

Decodering van PCR-analyse voor hepatitis C

Een speciale laboratoriumstudie - de analyse van hepatitis C ptsr - vereenvoudigt de diagnose van deze virale aandoening aanzienlijk. Een uitzondering is dat niet en hepatitis C. Een klein bloedmonster kan worden gecontroleerd op het gehalte aan RNA en ander genetisch materiaal van het virale agens. De analyse met de PCR wordt uitgevoerd door alle personen met antilichamen tegen hepatitis C die circuleren in het bloedplasma, waarvan de aanwezigheid de kwalitatieve detectie bevestigde.

De interpretatie van de resultaten wordt in de grafiek van de onderzoeksvorm geïnterpreteerd als een "positieve" of "negatieve" analyse. Bovendien is het met behulp van PCR niet alleen mogelijk om op kwalitatieve wijze het minimale gehalte van het virus te bepalen, maar ook om het aantal deeltjes te tellen. Het is dus mogelijk om de geschatte virale lading te bepalen en zo nauwkeurig mogelijk de medische tactiek van de behandeling te bepalen.

Virale schade aan de lever

De lever als een element van het spijsverteringskanaal neemt een enorme last op. In zijn cellen vindt het merendeel van de metabole reacties van alle soorten metabolisme plaats, wat zorgt voor een optimaal functioneren van alle organen en systemen. Tegelijkertijd is de detoxificatiewaarde groot voor het verwijderen van slakken en producten van het metabolisme met fermentatieve gal.

Het verslaan van de lever door virussen van verschillende aard is uiterst gevaarlijk voor het orgel. Een verscheidenheid aan ziektebeelden en niet-naleving van de behandeling van hepatitis leidt tot de eerste plaats in termen van gezondheidsrisico's. Hepatitis C is chronisch en kan langdurig een negatief testresultaat opleveren, waardoor het menselijk lichaam langzaam parasiteert. Het virus wordt overgedragen via biologische vloeistoffen: bloed en minder vaak via sperma. Narcotisch misbruik van niet-steriele spuiten, natuurlijke afgifte van geïnfecteerde vrouwen, letsels door gewonden of delen van gezondheidswerkers kan leiden tot de overdracht van het virus aan gezonde mensen.

Tijdige diagnose van de ziekte wordt belemmerd door een verborgen klinisch beeld en niet-systematische pathologie. Een positief resultaat kan eenvoudig worden gemist door testen van slechte kwaliteit. Alleen een significante laesie van de levercellen veroorzaakt een bepaalde symptomatologie, maar het negatieve effect van viremie tegen die tijd laat geen kans het orgel te herstellen.

De moderne geneeskunde heeft speciale methoden ontwikkeld om het geringste spoor van het virus te herkennen. PCR, ifa, leverbiopsie kan de minste schade aan de lever en het minimale niveau van antilichamen tegen het virus detecteren. De analyse met behulp van PCR is de meest eenvoudige en betrouwbare diagnostische praktijk.

Kwalitatieve analyse

De essentie van de polymerasereactie is de ontwikkeling van een RNA-sequentie. De reactie wordt uitgevoerd wanneer er dezelfde virale eiwitten in het bloedplasma zijn.

Speciale katalysatoren maken het mogelijk om een ​​vergelijkbare virale ketensequentie te synthetiseren, die wordt vergeleken met de bekende nucleotiden van het virale RNA. Op basis hiervan worden virale lading en leverschade bepaald.

PCR is in staat om zelfs een enkele aanwezigheid van het gewenste gen in het afgenomen bloed te detecteren. Deze diagnostische kettingreactie is ook zeer specifiek. De sequentie van nucleotide-ketens is uniek voor elk schepsel, zodat de enzymatische primers identieke sequenties van de gewenste genetische informatie creëren. Elk virus kan dus met de minste nauwkeurigheid worden gedetecteerd, zelfs als de kwantitatieve index extreem klein is.

Patiënten in wier bloed de ontwikkelde antilichamen tegen virale hepatitis werden aangetroffen, verrichten een kwalitatieve studie van ptsr of ifa. Het resultaat van de analyse kan zowel positief als negatief zijn, wat in beide gevallen behandeling vereist.

Ontcijfer de positieve reactie van de kettingreactie volgt als de aanwezigheid van RNA-fragmenten van het hepatitis-virus of als een fenomeen van infectie.

In het bloedplasma vermenigvuldigt het virus op actieve wijze de levercellen en parasiteert het. PCR-diagnostiek kan een negatieve respons geven als de deeltjes van het virale RNA iets in het plasma aanwezig zijn, onder het gevoeligheidsniveau van de test, of helemaal geen niveau. Na een directe infectie groeit de hoeveelheid van het virus relatief langzaam en pas na 1-2 weken kan IFA of ander kwalitatief onderzoek hen onderscheiden.

Negatieve analyse kan worden verkregen in de volgende gevallen:

  1. Bij het nemen van materiaal onder onjuiste omstandigheden, het verkrijgen van een bloedmonster met besmetting;
  2. Met eerdere injecties van de patiënt heparine.
  3. Wanneer andere enzymen en substraten aanwezig zijn in de genomen monsters, die het verloop van de kettingreactie verstoren.

Kwantitatieve analyse

De kwantitatieve test als microbiologische diagnose is ontworpen om de virale lading te bepalen. Bevestigde kwalitatieve analyse van viremie is de basis voor het bepalen van de hoeveelheid genetisch materiaal en de concentratie ervan. Het aantal gedetecteerde virale RNA's wordt bepaald in een eenheid van bloedvolume, gewoonlijk in 1 milliliter. De benodigde materialen worden uitgedrukt in internationale eenheden, sommige laboratoria in de analyse van ifa gebruiken het aantal exemplaren.

Gewoonlijk wordt vóór elk therapeutisch regime een kwantitatieve analyse van de PCR uitgevoerd. Virale RNA's worden vaak genoeg geteld: na één, vier, twaalf en vierentwintig weken. De 12e week wordt als indicatief beschouwd, omdat op basis van analyse in deze periode het decoderen van de effectiviteit van medische maatregelen wordt uitgevoerd.

Kwantitatieve analyse met behulp van PCR of ifa omvat het nemen van monsters uit de ader.

Interpretatie van resultaten als een hoge virale belasting begint bij een bedrag van 800.000 IE / ml. Een dergelijk positief resultaat voor hepatitis C weerspiegelt de aanwezigheid van ten minste 3.000.000 exemplaren in één milliliter bloed. Een laag niveau van viremie stopt bij een waarde van 400.000 IU / ml. De resultaten van de studie kunnen waarden zijn als een negatieve respons, evenals een "onder het meetbereik".

Een kwantitatieve test met een schatting "onder het meetbereik" zegt dat de reactie het RNA niet kon berekenen. Het virus circuleert wel in het lichaam, zoals blijkt uit een positieve kwalitatieve test. Een negatieve indicator van kwantitatieve analyse van ptsr of ifa geeft de afwezigheid van RNA in dit bloedmonster aan.

Ondanks de beperkte overdracht van het virus door het bloed, neemt het risico van overdracht van het virus door de geheimen van de geslachtsklieren, van moeder op kind, toe.

Kwantitatieve analyse biedt belangrijke hulp bij het evalueren van therapeutische interventies. Ifa en ptsr weerspiegelen het effect van antivirale geneesmiddelen, helpen de timing van de therapie vast te stellen en beoordelen de vorming van immuniteit bij patiënten. Een vroege negatieve respons van laboratoriumtesten duidt op een succesvolle behandeling en de noodzaak om de behandelingsduur te verkorten. De langzame afname van de viraliteitscijfers kan worden ontcijferd als de noodzaak om het therapeutische verloop te wijzigen. Het niveau van de virale lading bepaalt de prognose van de ziekte. Hepatitis met een lage snelheid wordt waarschijnlijk eenvoudigweg behandeld en kan het virus volledig uit het lichaam verwijderen. Hoge percentages virale aanwezigheid in het bloed vereisen een attente behandeling en een veelzijdige behandeling.

Kwalitatieve analyse voor hepatitis C

Laat een reactie achter

Kwalitatieve analyse van polymerasekettingreactie - PCR voor hepatitis C bepaalt de aanwezigheid of afwezigheid van HCV in het lichaam. In het laboratorium wordt de structuur van het RNA bestudeerd, waarin het virus zich zal bevinden. Als een virus C wordt gedetecteerd, is het noodzakelijk om een ​​behandeling te ondergaan, omdat een verwaarloosde leveraandoening ernstige gevolgen heeft. Kwalitatieve PCR wordt uitgevoerd na herstel om de afwezigheid van antilichamen te bevestigen. Benoemd en voor preventief onderzoek. Bij een lage concentratie van het pathogeen in het bloed kan PCR (kwalitatief) niets detecteren, omdat het diagnosesysteem zijn gevoeligheidsdrempels heeft. In het geval van een eerste stadium van de ziekte of een milde vorm, wordt de PCR uiteindelijk gediagnosticeerd met ultragevoelige apparatuur.

Wat is een RNA-virus?

De term RNA van hepatitis C-virus (of hepatitis C-virus-RNA) wordt zelf leverziekte genoemd. Virus C bindt zich aan een gezonde lichaamscel en dringt binnen. Na verloop van tijd, verspreid door het lichaam, is het alleen om in het bloed te komen. Het gevolg is dat de ziekteverwekker de lever binnendringt, zich vermengt met zijn cellen en hard werkt. Levercellen (hepatocyten) werken onder zijn invloed, ondergaan veranderingen en gaan ten onder. Hoe langer het virus C in de lever zit, hoe meer cellen afsterven. Na verloop van tijd ontwikkelen zich gevaarlijke ziektes die leiden tot kwaadaardige degeneratie en dood.

Infectie van de lever met dit type virus kan op geen enkele manier extern worden gemanifesteerd. Gedurende vele of tientallen jaren voelt de geïnfecteerde persoon zich volledig gezond en alleen een onderzoek per ongeluk onthult meestal een pathologie. Bij het doneren van bloed voor hepatitis wordt een deel van de RNA (ribonucleïnezuur) keten die deel uitmaakt van het menselijke gen (DNA) onderzocht. De resultaten van laboratoriumonderzoek mogen niet worden gebruikt voor zelfbehandeling, omdat dit slechts een indicator is. De arts zal het exacte beeld en de verdere diagnose bepalen.

Wanneer gedaan: getuigenis van de studie

Om de HCV te bevestigen, wordt PCR-analyse (polymerasekettingreactie) toegewezen. PCR-onderzoeken helpen bij het vinden van het pathogeenmateriaal in de RNA-structuur en schrijven effectieve therapie voor. Benoemd in de volgende gevallen:

  • identificatie van tekenen van leverontsteking;
  • screeningstudies voor preventie;
  • onderzoek van contactpersonen;
  • diagnose van hepatitis van gemengde oorsprong (definitie van de belangrijkste ziekteverwekker);
  • Bepaling van het niveau van activiteit van virusreproductie in chronische vorm;
  • cirrose van de lever;
  • om de effectiviteit van de voorgeschreven behandeling te bepalen.
PCR-onderzoeken worden door een arts toegewezen om de effectiviteit van het verloop van de behandeling van hepatitis te bepalen.

Er is zowel een kwalitatieve als een kwantitatieve analyse van PCR. Kwantitatieve PCR toont het percentage RNA met de dragers van het virus in het bloed en de kwalitatieve PCR geeft een virale aanwezigheid of afwezigheid aan. Een positieve indicator van kwaliteit (de aanwezigheid van hepatitis C-RNA) vereist ook een kwantitatief onderzoek. Een hoog concentratieniveau van de pathogeen van hepatitis C hangt samen met het risico van overdracht, dat wil zeggen besmetting van anderen. Lage hoeveelheden worden beter behandeld. De hoeveelheid RNA-virussen in het bloed is niet gerelateerd aan de intensiteit van de ziekte. De PCR-analyse wordt ook uitgevoerd in het geval van interferon-therapie, om de duur en de complexiteit van de behandelingskuur voor te schrijven.

Kenmerken van kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C

Een kwalitatieve analyse met een polymerasekettingreactie-index wordt toegekend aan alle patiënten die antilichamen tegen hepatitis C in hun bloed hebben. Wie hersteld en hersteld is, moet opnieuw worden getest. Aanbevolen wordt om getest voor hepatitis B en vervolgens, bij een positieve afsluiting, en hepatitis D ook kwalitatief geanalyseerd reakatsiya dient in samenhang met andere bloedonderzoeken worden uitgevoerd. Analyses zullen een compleet beeld geven van de virusverspreiding.

Uit de testresultaten zal alleen een positieve test voor hepatitis C of negatief, dat wil zeggen de aanwezigheid of afwezigheid van het virus, worden gezien. Als de conclusie "wordt gedetecteerd", is en blijft het virus actief acteren. De aanduiding "niet gevonden" geeft de afwezigheid van het virus of de kleine hoeveelheid aan. Met deze indicator moet rekening worden gehouden met het feit dat de analytische gevoeligheid van diagnostische systemen anders is en dat RNA-hepatitis C nog steeds in het bloed kan zijn, maar niet in de analyse kan voorkomen.

Een bijzonder gevoelige methode van PCR ultra-hepatitis C onthult zelfs in kleine hoeveelheden. Een hybridisatie-fluorescente studie wordt gebruikt die vele malen hoger is dan standaard PCR-systemen. De methode wordt in verschillende gevallen gebruikt:

  • verdachte verborgen vormen van hepatitis C;
  • De diagnose van PCR werd niet bevestigd door het pathogeen, maar er zijn antilichamen;
  • in geval van herstel;
  • om het vroege stadium van infectie te identificeren.
Terug naar inhoud

Toelichting op de analyse

De uiteindelijke beslissing in de diagnose wordt beïnvloed door PCR-decodering van HCV, in het bijzonder met ultramethode. Het belangrijkste nadeel van dit onderzoek is de strikte naleving van steriele omstandigheden voor het monster en de materialen. Een kleine afwijking vertoont soms onnauwkeurige conclusies van de analist, compliceert de diagnose en daaropvolgende behandeling. Analyse van PCR voor de bepaling van RNA van hepatitisvirus toont niet altijd het beeld van de ziekte met vertrouwen, soms worden onnauwkeurigheden toegelaten, op beide manieren.

Bij het diagnosticeren van het hepatitis-virus wordt aanbevolen een uitgebreid onderzoek uit te voeren.

Norm van indicatoren

De afwezigheid van JgM-antilichamen tegen RNA bij virale hepatitis C wordt beschouwd als de norm bij de analyse van de polymerasekettingreactie. Tegelijkertijd wijzen de bevindingen van serologische analyse op de aanwezigheid van antilichamen tegen het virus C en dit ligt ook binnen de grenzen van de norm. Een kwalitatieve definitie toont niet de intensiteit van de ziekte, het onthult alleen de veroorzaker van hepatitis C in RNA. Een dergelijke analyse wordt na de behandeling herhaald om het daadwerkelijke herstel te bevestigen.

afwijkingen

Als JgM-antilichamen tegen HCV-RNA aanwezig zijn, duidt dit op een zich ontwikkelende infectie. De ziekte is acuut of chronisch, manifesteert zich in verschillende stadia. Als een afname van het aantal antilichamen wordt geregistreerd, geeft de analyse aan dat de resultaten van de behandeling tijdens het herstel zijn behaald. Er zijn uiterst zeldzame gevallen van vals positieve bevindingen in de diagnose. Ze zijn te vinden bij vrouwen tijdens de zwangerschap en bij mensen met andere besmettelijke ziekten.

PCR-studie voor hepatitis C: types, indicaties, transcript

Virale hepatitis C is een ernstige ziekte die optreedt met leverschade. Bij tachtig procent van de patiënten gaat het over in een chronische vorm. Het virus vermenigvuldigt zich in levercellen - hepatocyten - en veroorzaakt hun dood. Dood weefsel wordt vervangen door brandpunten van bindweefsel, er ontwikkelt zich fibrose.

Met de ontwikkeling van leverfibrose in staat is zijn functie uit te voeren, begint cirrose, die gevaarlijk zijn voor de complicaties ervan is: het verhogen van de druk in de poortader, gastro-intestinale bloeden, verstoorde bloedstolling, mentale veranderingen als gevolg van de hersenen kernen toxische producten beschadigen.

De oorzaak van de ziekte is infectie met een virus uit de Flaviviridae-familie, een soort RNA-virus. Dit betekent dat het genetische materiaal waarmee eiwitten van de pathogeen worden gesynthetiseerd wordt gecodeerd in een molecuul van ribonucleïnezuur. Infectie gebeurt door het bloed, seksueel, en van een zwangere vrouw naar de foetus. Helaas kan tussen infectie en het begin van de productie van antilichamen een vrij grote hoeveelheid tijd verstrijken - van twee weken tot zes maanden. Dit laat niet toe om de infectie te bepalen met de methode van enzymimmunoassay en start de behandeling in de vroege stadia.

Wat is PCR-analyse?

PCR is een methode voor moleculaire analyse waarmee het genetische materiaal van het pathogeen al in de eerste week na infectie kan worden gedetecteerd met behulp van een polymerasekettingreactie. De studie heeft een hoge specificiteit en nauwkeurigheid en maakt het niet alleen mogelijk de aanwezigheid of afwezigheid van het virus te bepalen, maar ook de concentratie en het genotype.

Neem voor de studie het bloed van de patiënt, waarin het RNA van het virus mogelijk kan worden gevonden. In het bloed worden primers toegevoegd - kunstmatig gesynthetiseerde delen van het gewenste gen van kleine lengte, en RNA-polymerase is een speciaal enzym dat de hoeveelheid genetisch materiaal van het pathogeen vermenigvuldigt. Met behulp van een speciaal apparaat worden verschillende cycli van verwarmen en koelen uitgevoerd. Het materiaal wordt vervolgens geanalyseerd en vergeleken met bekende virusgenen, op basis waarvan een conclusie wordt getrokken over de aan- of afwezigheid van een infectie.

Typen PCR-analyse voor hepatitis C

Er zijn drie soorten PCR-analyse:

  1. Kwalitatieve PCR-analyse. De eerste fase van het onderzoek. Hiermee kunt u het genetisch materiaal van het virus in het bloed identificeren.

  • Kwantitatieve analyse van PCR. Hiermee kan de virale last worden bepaald - de concentratie van het genetisch materiaal van de ziekteverwekker in één milliliter bloed. Deze studie wordt uitgevoerd vóór het begin van de therapie en vervolgens op de eerste, vierde, twaalfde en (als de cursus lang duurt) de vierentwintig week van de behandeling om de effectiviteit ervan te evalueren.

  • genotypering. De veroorzaker van hepatitis C muteert vaak en snel. Op de planeet werden zeven varianten van het genotype van dit virus gevonden. In Rusland zijn het eerste, tweede en derde type gebruikelijk. Elk van de genotypes heeft verschillende weerstand tegen therapie, bijvoorbeeld, de effectiviteit van de behandeling van het eerste type is zestig procent, en voor het tweede en derde deel bereikt het vijfentachtig. Daarom is het, om geschikte geneesmiddelen te selecteren en een behandelingsduur van voldoende duur voor te schrijven, nodig om exact te bepalen met welk type virus de patiënt is geïnfecteerd.
  • Indicaties voor PCR-analyse voor hepatitis C

    PCR-onderzoek wordt voorgeschreven in de volgende gevallen:

    • contact met een zieke persoon, die tot infectie kan leiden;
    • positieve enzymgekoppelde immunoassay;
    • verschijnselen van levercirrose: veranderingen in levergrootte, vergrote milt, verschijning van subcutane veneuze plexus op de buik;
    • het optreden van symptomen van leverschade: pijn in de rechterkant van de buik, gele verkleuring van de huid;
    • verhoogde activiteit van ALT en AST in biochemische bloedanalyse;
    • voordat de behandeling wordt gestart om de virale lading te bepalen;
    • om de effectiviteit van antivirale therapie te controleren;
    • na voltooiing van de behandeling om terugval te volgen;
    • in aanwezigheid van gediagnosticeerde hepatitis B, om gemengde leverschade uit te sluiten.

    Decodering van PCR-studie voor hepatitis C

    Decodering van PCR-analyse en enzymimmunoassay voor hepatitis C dient te worden geadresseerd door een hepatoloog of specialist in besmettelijke ziekten. Analyse van de resultaten van PCR is noodzakelijk in combinatie met biochemisch bloedonderzoek, biopsie en echografie. Alleen een gekwalificeerde arts kan de resultaten van de onderzoeken analyseren en op basis daarvan de juiste behandeling voorschrijven.

    Decodering van kwalitatieve analyse.

    Het genetische materiaal van het pathogeen werd gevonden in het geanalyseerde biologische materiaal. Infectie is bevestigd.

    Er is geen infectie of de hoeveelheid RNA van het pathogeen ligt onder de gevoeligheidslimiet.

    Decodering van kwantitatieve analyse.

    Een normaal cijfer voor gezonde mensen. Het betekent dat er geen hepatitis C-RNA in het testmateriaal zit of dat de concentratie onder de gevoeligheidsdrempel van het onderzoek ligt.

    Concentratie van RNA ligt onder het bereik van kwantificering. Dergelijke resultaten worden zeer voorzichtig geïnterpreteerd, correleren ze met de gegevens van andere onderzoeken en voeren vaak een tweede onderzoek uit.

    Het niveau van virale lading bij een gegeven concentratie wordt als laag beschouwd. Gewoonlijk betekent een afname van de hoeveelheid virus dat de therapie succesvol is.

    Meer dan 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Het niveau van virale lading bij een gegeven concentratie wordt als hoog beschouwd.

    Meer dan 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    De hoeveelheid RNA ligt boven de bovengrens van het kwantificeringsbereik. Doe met dit resultaat geen conclusies over de mate van virale lading. Meestal wordt in dergelijke gevallen de test herhaald met de verdunning van het bloedmonster.

    Decoderen van genotypering.

    RNA van een specifiek genotype werd gedetecteerd

    In het biomateriaal wordt hepatitis C-virus van een specifiek genotype en subtype gedetecteerd. Het resultaat is gecodeerd in Romeinse cijfers en Latijnse letters, bijvoorbeeld - 1a, 2b. Er zijn zeven genotypes en zevenenzestig subtypen, maar in Rusland zijn er maar drie eerste typen.

    Hepatitis C-virus-RNA werd gedetecteerd

    In het bloed is RNA een zeldzaam genotype voor Rusland gevonden, dat niet kan worden toegeschreven aan het eerste, tweede of derde type. Meer onderzoek is nodig.

    Dit resultaat geeft aan dat de patiënt gezond is of dat het RNA-niveau van het pathogeen te klein is.

    Een situatie is mogelijk wanneer de PCR-analyse voor hepatitis C negatief is en de enzymimmuuntest antilichamen tegen het virus detecteert. Dit betekent dat de patiënt hepatitis C in acute vorm heeft gehad en zichzelf heeft genezen. Ongeveer twintig gevallen van infectie resulteren in spontane genezing als het lichaam van de patiënt voldoende weerstand tegen infectie uitoefent.

    Ondanks het feit dat PCR een zeer nauwkeurige analyse is, kunnen de resultaten daarvan in de volgende situaties worden vervormd:

    • bloed werd onder ontoereikende omstandigheden naar het laboratorium getransporteerd, het temperatuurregime werd geschonden;
    • het monster van het biomateriaal was verontreinigd;
    • in het bloed waren er restsporen van heparine en andere anticoagulantia;
    • In de onderzochte stof waren remmers - stoffen die de polymerasekettingreactie vertragen of stoppen.

    Voordelen van PCR ten opzichte van andere methoden

    1. Diagnose in de vroege stadia. PCR detecteert het genetische materiaal van de veroorzaker van de ziekte. Met behulp van immunofluorescentieanalyse is het mogelijk om alleen immunoglobulines te bepalen - stoffen die het lichaam produceert als reactie op een infectie. In het geval van hepatitis C-infectie kan het interval tussen infectie en het begin van een immuunrespons enkele weken en maanden zijn, op welk moment ELISA niet effectief zal zijn. PCR geeft al een antwoord in de eerste week na infectie.

  • Lage kans op fouten. In het bestudeerde materiaal wordt het genetische materiaal bepaald, dat alleen kenmerkend is voor één type pathogenen. Hiermee kunt u valse resultaten uitsluiten. Met ELISA zijn fouten mogelijk, omdat dezelfde soort antilichamen kunnen worden vrijgegeven tegen verschillende virussen - dergelijke antilichamen worden kruisreactief genoemd.

  • Hoge gevoeligheid. PCR kan RNA van het pathogeen zelfs in minimale hoeveelheden detecteren. Dit maakt het mogelijk om verborgen infecties te identificeren.
  • Voorbereiding op bloedafgifte voor PCR-onderzoek

    Voor PCR-analyse wordt veneus bloed verzameld voor hepatitis C. Gewoonlijk worden twee delen bloed onmiddellijk uit de ader van de patiënt genomen: de eerste wordt verzonden voor PCR en de tweede voor ELISA. Dit wordt gedaan om nauwkeuriger te kunnen beoordelen hoe ernstig de patiënt is geïnfecteerd met het virus en hoe de immuniteit hiertegen vecht.

    Meestal zijn de volgende regels van de patiënt vereist:

    • een bloedtest wordt 's morgens afgenomen;
    • de pauze tussen de laatste maaltijd en de aflevering van bloed moet acht tot tien uur zijn;
    • twee of drie dagen voor de analyse moet je gefrituurd en vet voedsel en alcohol opgeven;
    • vierentwintig uur vóór de analyse moet de patiënt fysieke inspanning vermijden: draag geen gewichten, ga niet naar een sportschool of zwembad.

    Kwalitatieve en kwantitatieve analyse van PCR voor hepatitis C: negatief, positief, decodering

    Hepatitis C is een virale aandoening van de lever die wordt veroorzaakt door het flavivirus HCV (van het Engelse hepatitis C-virus), dat een ribonucleïnezuur (RNA) -molecuul bevat. RNA draagt ​​de genetische code van het virus. De aanwezigheid ervan maakt de analyse van PCR voor hepatitis C mogelijk.

    Het gevaar van HCV voor mensen is dat het zogenaamde serologische venster (het tijdsinterval tussen infectie en het optreden van een reactie van het immuunsysteem) vrij lang kan zijn - van enkele weken tot zes maanden.

    Dit onthult de infectie niet en start de behandeling op tijd.

    Afhankelijk van de individuele kenmerken van het lichaam van de gastheer, kan HCV zich manifesteren in een acute vorm en zich ook ontwikkelen als een chronische ziekte die langdurige en dure behandeling vereist. Bij het opsporen van antilichamen tegen HCV, worden een aantal laboratoriumtests uitgevoerd, waaronder PCR voor hepatitis C. Deze test wordt uitgevoerd voor alle mensen in wier bloed de antilichamen tegen HCV zijn aangetroffen.

    Wat is PCR-analyse?

    Laboratoriumanalyse van PCR voor hepatitis C - een studie van biologisch materiaal om de aanwezigheid van flavavirus te identificeren.

    Polymerase-kettingreactie (zoals de afkorting wordt ontcijferd) toont de kwantitatieve waarde van de virale schade van het organisme, de kwalitatieve kenmerken ervan, en ook het genotype van het virus-bevattende RNA.

    Op basis hiervan, evenals op basis van aanvullende analyses, worden de methode en duur van de therapie bepaald, evenals de epidemiologische factor (het risico van overdracht op een andere vervoerder).

    Wat is RNA-analyse voor hepatitis C?

    De hepatitis C-PCR wordt ook RNA-analyse (HCV-RNA) genoemd, omdat deze niet bekend is. Flavavirus bevat een RNA-deeltje met een viriongrootte van 30-60 nm. Een van de kenmerken van dit micro-organisme is een hoge neiging tot mutaties.

    Elk van de ondersoorten (genotypes) van het virus heeft verschillende resistentie, wat verschillende behandelingsmethoden en de aard van de verdere prognose voor de patiënt veroorzaakt.

    Biologisch materiaal (veneus bloed) wordt behandeld vasten en meestal getest door Real-Time PCR (zeer gevoelige real-time diagnose aan de ondergrens van 15 IU / ml werd bepaald met de geautomatiseerde gesloten systeemmodus).

    Er zijn andere tests, bijvoorbeeld COBAS AMPLICOR met een gevoeligheid van 50-100 IU / ml. Voor elk laboratoriumonderzoek is de gevoeligheidsdrempel belangrijk, d.w.z. het vermogen van het reagens om de minimale concentratie van het virus in het biologische materiaal te detecteren.

    Typen analyse voor hepatitis C met behulp van de PCR-methode

    PCR voor hepatitis C omvat drie belangrijke componenten:

    • kwalitatieve analyse;
    • kwantitatieve analyse;
    • genotypering.

    Deze tests kunnen de aard van viremie bepalen, evenals de genetische tekenen van de ziekteverwekker. Afhankelijk van de gevoeligheid van het diagnosesysteem, wordt de test eenmaal uitgevoerd en soms wordt een tweede test met een gevoeliger reagens uitgevoerd om de resultaten te bevestigen of te verfijnen.

    Hoogwaardige hepatitis C-PCR

    PCR-analyse voor hepatitis C-kwaliteit is een andere veel voorkomende naam voor de polymerasekettingreactiebepaling. De standaardgevoeligheid van de test, die het mogelijk maakt de aanwezigheid van een virale laesie te detecteren, ligt in het bereik van 10-500 IU / ml.

    Negatieve analyse van PCR voor hepatitis C toont aan dat de concentratie van het virus in het bloed van de patiënt lager is dan de drempel van de gevoeligheid van het diagnostische systeem.

    Als kwalitatieve PCR een "niet-gedetecteerd" antwoord gaf, dan is het voor de daaropvolgende behandeling belangrijk om de gevoeligheidsdrempel van het reagens te kennen.

    De eiwitfracties aan flavavirus verschijnen veel later.

    Kwantitatieve hepatitis-C-PCR

    PCR hepatitis C-kwantitatief is een indicator van een virale belasting die het niveau van concentratie van flavavirus-RNA in het lichaam weerspiegelt. Dit is een indicator die aangeeft hoeveel fragmenten van viraal RNA zich bevinden per kubieke centimeter bloed. De resultaten van het PCR-RNA van hepatitis C in een conventioneel systeem worden uitgedrukt in internationale eenheden per milliliter (IE / ml) en kunnen op verschillende manieren worden geregistreerd, bijvoorbeeld 1,7 miljoen of 1,7 miljoen IE / ml.

    Kwantitatieve PCR-diagnose van hepatitis C wordt gegeven aan patiënten vóór het begin van de antivirale therapie en in week 12 van de behandeling om de resultaten van de geselecteerde methode om HCV te bestrijden te evalueren. Virale belasting stelt u in staat om drie belangrijke indicatoren van de ziekte te identificeren:

    • infectiviteit, d.w.z. de mate van risico van transmissie van het virus van de ene drager naar de andere (hoe hoger de concentratie van flavavirus-RNA, hoe groter de kans op het infecteren van een andere persoon, bijvoorbeeld tijdens seksueel contact);
    • methode en effectiviteit van de behandeling;
    • duur en prognose van antivirale therapie (hoe hoger de virale last, hoe langer de behandeling duurt).

    Kwantitatieve PCR-diagnose van hepatitis C hangt af van het type laboratoriumtest en de gevoeligheidsdrempel. De ondergrens van de norm wordt meestal beschouwd als maximaal 600.000 IE / ml, de gemiddelde waarde ligt in het bereik van 600.000-700.000 IU / ml. Resultaten van 800.000 IU / ml en hoger worden beschouwd als hoge niveaus van RNA-bevattend virus.

    genotypering

    Gezien de hoge mutatieactiviteit van HCV in de natuur, is het belangrijk om in het teststadium te bepalen welk genotype van het virus zich in het bloed van de patiënt bevindt. In totaal zijn 11 genotypen van het hepatitis C-virus op de planeet geregistreerd, waaronder veel ondersoorten. Op het grondgebied van de Russische Federatie zijn 1,2 en 3 gebruikelijk.

    PCR-RNA van hepatitis C samen met genotypering is een zeer belangrijk onderdeel van de analyse, omdat stelt de arts in staat om de weerstand (resistentie) van het virus te bepalen, geschikte medicijnen te selecteren en een behandelingskuur voor te schrijven.

    Genotypering stelt u ook in staat om indirect de conditie van de lever te bepalen. Het 3-genotype van HCV gaat bijvoorbeeld vaak gepaard met steatosis, waarbij vet zich ophoopt in de cellen van het lichaam.

    De bloedtest voor PCR in hepatitis C zou een cijfer moeten geven dat het genotype bepaalt. In antwoorden van laboratoria kan worden geschreven "niet getypt" - en dit betekent dat er een virus in het menselijk bloed zit dat niet door het testsysteem wordt bepaald. Dit kan erop duiden dat het genotype niet karakteristiek is voor een bepaald geografisch gebied. In dit geval is het noodzakelijk om de analyse opnieuw te passeren met een hogere gevoeligheid van het diagnosesysteem.

    Decodering van PCR-analyse voor hepatitis C

    De test voor hepatitis C PCR kan worden gekwantificeerd op basis van de bovenstaande gegevens. Wanneer de resultaten van laboratoriumtests worden ontvangen, worden de volgende gegevens gewoonlijk geschreven:

    • "Found" / "not found" (hoge kwaliteit PCR voor hepatitis C);
    • de hoeveelheid RNA-bevattende fracties, bijvoorbeeld 831.680 IU / ml (kwantitatieve PCR-bepaling);
    • de figuur die het HCV-genotype bepaalt, bijvoorbeeld - 1, 2, 3, 4;
    • de naam van de test is meestal realtime.

    Het belangrijkste bij het ontcijferen van de PCR-analyse voor hepatitis C is het tweede item, dat de virale lading toont die de prognose, de methode en de duur van de behandeling bepaalt.

    Als PCR-analyse voor hepatitis C negatief is en ELISA positief - wat betekent dit?

    Om laboratoriumtests te ontcijferen, is het belangrijk om contact op te nemen met een hepatoloog of specialist in infectieziekten, die de ontvangen informatie zal uitleggen in overeenstemming met het type diagnostisch systeem en de gevoeligheidsdrempel. In de medische praktijk zijn er veel bloedtestgegevens die een persoon zonder medische voorlichting in verwarring kunnen brengen.

    Indien bijvoorbeeld de test voor HCV PCR-negatief en positief ELISA, kan worden aangegeven dat op dit moment in het bloed van de patiënt niet HCV, maar voordat hij een acute vorm van hepatitis C. leed Aangenomen wordt dat de positieve-linked immunosorbent assay (ELISA) blijkt dat in het bloed zijn er antilichamen geproduceerd na de invasie van het virus in het verleden. Maar in de moderne medische praktijk ELISA-analyse is niet voldoende betrouwbaar en geeft vaak ongebruikelijke resultaten, zodat artsen gebruiken het als een primaire screening. Bij het diagnosticeren van de ziekte worden specialisten precies door PCR-tests geleid.

    Handige video

    In de volgende video is het zeer gedetailleerd en interessant om te vertellen wat de essentie van de PCR-methode is, hoe de analyse is voltooid:

    conclusie

    Veneus bloed wordt meestal gebruikt voor analyse van hepatitis-C-PCR. Meestal is er een dubbele bemonstering van een biologisch materiaal - voor ELISA en direct voor een PCR-test. Voor de juiste testresultaten is naleving van de belangrijkste regels voor laboratoriumbemonstering van biologisch materiaal vereist:

    • bloed voor analyse wordt 's morgens op een lege maag toegediend;
    • tussen het eten en het nemen van bloed moet ten minste 8 uur duren;
    • Voordat u de test doet, moet u ook alcohol en gefrituurd voedsel uitsluiten;
    • Gedurende de dag voordat je bloed geeft, moet je een hoge fysieke inspanning vermijden.

    De resultaten van bloedonderzoek zijn meestal de volgende dag klaar.


    Gerelateerde Artikelen Hepatitis