Wat is hepatitis C-virus-RNA?

Share Tweet Pin it

De studie van RNA van hepatitis C-virus is de belangrijkste procedure, die het mogelijk maakt om de duur en methoden voor de behandeling van patiënten met grote nauwkeurigheid in te stellen. Diagnose van de ziekte bestaat uit verschillende bloedtesten, zoals:

  • markers van hepatitis C (anti-HCV);
  • detectie van hepatitis C-virus-RNA (HCV-RNA).

De eerste studie wordt gedaan met het eerste vermoeden van hepatitis. De tweede optie is het meest significant bij de behandeling van HCV-RNA, dus beschouw het in meer detail.

Wat is virale hepatitis C?

Virale hepatitis C of HCV is een infectieziekte die de lever aantast. Infectie met het virus vindt plaats door het bloed. U kunt besmet raken door een bloedtransfusie te doen, wanneer de regels voor het steriliseren van medische instrumenten niet worden gerespecteerd. Er zijn minder gevallen waarin de ziekte seksueel wordt verkregen of van een zwangere moeder tot een foetus. Hepatitis C is van 2 soorten.

Chronische hepatitis C is het gevaarlijkst. Het is een vorm van ziekte die een leven lang kan duren. Het leidt tot ernstige problemen bij het functioneren van de lever, zoals cirrose of kanker. Bij 70-90% van de geïnfecteerde personen gaat de ziekte over in een chronische fase.

Het grootste risico voor hepatitis C is dat het gebeurt discreet zonder icterisch functies. In dit geval, klagen vaak over de verhoging van de temperatuur, misselijkheid en braken, lichamelijke zwakte, vermoeidheid, verlies van eetlust en gewichtsverlies. Dus tegen de kleine afdichting leverweefsel optreedt, vaak genoeg maligne transformatie. Om deze reden wordt hepatitis C vaak aangeduid als "tijdbommen" of "zachte killer".

Een andere bijzonderheid van de ziekte ligt in zijn zeer langzame ontwikkeling, geschat in tientallen jaren.

In de regel voelen de geïnfecteerden geen symptomen en verdenken ze hun ware toestand niet. Vaak kan de ziekte alleen worden vastgesteld als naar een arts in een ander geval wordt verwezen.

De risicogroep omvat:

  • kinderen die het hepatitis C-virus van moeders ontvingen;
  • drugsverslaafden;
  • mensen die lichaamsdelen doorstoken of tatoeages niet-steriel gereedschap maakten;
  • donorbloed of -organen kregen (tot 1992, toen hemodialyse niet werd uitgevoerd);
  • mensen besmet met HIV;
  • Medische hulpverleners in contact met geïnfecteerde patiënten.

Bepaling van hepatitis C-RNA

Bepaling van hepatitis C virus RNA, ook wel hepatitis C PCR studie van de biologische materiaal (bloed), waarmee je kan identificeren in het lichaam van de onmiddellijke beschikbaarheid van genomateriala hepatitis B-virus (elk virus een enkel deeltje RNA).

De belangrijkste testmethode is PCR of de polymerasekettingreactiemethode.

Er zijn twee soorten bloedtesten voor de bepaling van HCV RNA:

Kwaliteitstest

Het uitvoeren van kwalitatieve analyse maakt het mogelijk om te bepalen of het virus in het bloed zit. Alle patiënten die C-hepatitis-antilichamen hebben, moeten deze test ondergaan. Door de resultaten kunt u 2 antwoorden krijgen: "aanwezig" of "vermist" het virus. Op het positieve testresultaat (gevonden), is het mogelijk om de actieve vermenigvuldiging van een virus dat gezonde cellen in de lever infecteert te beoordelen.

De test, uitgevoerd voor hoogwaardige PCR, is afgestemd op een specifieke gevoeligheid, van 10 tot 500 IU / ml. Als het hepatitis-virus in het bloed wordt aangetroffen met een specifiek gehalte van minder dan 10 IE / ml, kan detectie van het virus onmogelijk worden. Een zeer lage waarde van het specifieke gehalte van het virus wordt waargenomen bij patiënten voor wie antivirale therapie wordt voorgeschreven. Daarom is het belangrijk dat de gevoeligheid van het medische systeem hoog is voor het diagnosticeren en instellen van een kwalitatief resultaat in een polymerasekettingreactie.

Vaak wordt de polymerasekettingreactie van C-hepatitis onmiddellijk uitgevoerd na het vinden van de overeenkomstige antilichamen. Daaropvolgende tests, wanneer antivirale therapie voorbij gaat, worden uitgevoerd op de 4e, 12e en 24e week. En een andere analyse na beëindiging van PVT vindt plaats na 24 weken. Dan - een keer per jaar.

Kwantitatieve test

De kwantitatieve analyse van PCR-RNA, soms aangeduid als virale lading, bepaalt de concentratie (specifiek gehalte) van het virus in het bloed. Met andere woorden, virale belasting wordt gedefinieerd als een bepaalde hoeveelheid viraal RNA, die in een specifieke hoeveelheid bloed kan zijn (het is gebruikelijk om 1 ml te gebruiken, gelijk aan 1 cm in een kubus). Eenheden voor testresultaten zijn internationale (standaard) eenheden, gedeeld door één milliliter (IU / ml). De inhoud van het virus lijkt soms anders, het hangt af van de laboratoria waar het onderzoek wordt uitgevoerd. Voor hepatitis C gebruikt kwantificering soms waarden zoals kopieën / ml.

Er moet worden begrepen dat er geen specifieke afhankelijkheid is van de ernst van C-hepatitis op de concentratie van deze stam in het bloed.

Als u de "virale last" controleert, kunt u de mate van infectiviteit van de ziekte bepalen. Dus het risico op besmetting met andermans virus neemt toe met een toename van de concentratie van hepatitis in het bloed. Bovendien vermindert het hoge gehalte van het virus het effect van de behandeling. Daarom is een kleine virale lading een zeer gunstige factor voor een succesvolle behandeling.

Bovendien spelen de hepatitis C-test en de bepaling ervan door PCR een grote rol bij de toepassing van therapie tegen de ziekte en het bepalen van het succes van de behandeling. Op basis van de testresultaten is de revalidatiecursus gepland. Bijvoorbeeld, met een te langzame afname van de specifieke concentratie van het hepatitis-virus, is antivirale therapie verlengd en vice versa.

In de moderne geneeskunde wordt aangenomen dat de belasting meer dan 800000 ME / ml hoog is. De belasting is meer dan 10000000 ME / ml wordt als kritiek beschouwd. Maar experts uit verschillende landen hadden tot op de dag van vandaag niet dezelfde mening over de limieten van de virale lading.

De frequentie van de kwantitatieve test

Over het algemeen wordt kwantitatieve analyse van hepatitis uitgevoerd vóór antivirale therapie en 3 maanden na het einde van de behandelingsprocedures om de kwaliteit van de therapie te bepalen.

Als een resultaat zal de kwantitatieve test worden beschouwd als een kwantitatieve evaluatie van de resultaten van het hierboven gespecificeerde monster. Dientengevolge zal een uitspraak "onder het gemeten bereik" of "in het bloed zal niet worden gedetecteerd" worden weergegeven.

De gevoeligheidsparameter van de kwalitatieve test is meestal lager dan de gevoeligheid van de kwantitatieve analyse. Het transcript 'Ontbrekend' geeft aan dat beide soorten analyses het RNA van het virus niet hebben gevonden. Met de test "onder het gemeten bereik" vond kwantitatieve analyse waarschijnlijk geen hepatitis-RNA, hoewel dit de aanwezigheid van een virus met een zeer kleine specifieke inhoud bevestigt.

Hepatitis C en zijn genotypen

Genotyperen van hepatitis C virus RNA diagnose van de aanwezigheid van verschillende genetische typen hepatitis C. Science kent meer dan 10 types van het virusgenoom, maar de medische praktijk voldoende onderscheiden verschillende genotypes met het grootste deel van de regio. Het bepalen van het genetische type speelt een sleutelrol bij het kiezen van de timing van de behandeling, wat zeer noodzakelijk is als men rekening houdt met het brede scala aan bijwerkingen van hepatitis-geneesmiddelen.

Methoden voor de behandeling van virale hepatitis C

De enige effectieve manier om het hepatitis-virus te genezen, is in de regel een combinatie van twee medicijnen: interferon-alfa samen met ribavirine. Los daarvan zijn deze medicijnen niet zo effectief. De aanbevolen dosering van geneesmiddelen en de timing van toediening moeten alleen door de arts en afzonderlijk aan elke patiënt worden voorgeschreven. Behandeling met deze geneesmiddelen kan 6 tot 12 maanden aanhouden.

Tegenwoordig zijn er geen geneesmiddelen uitgevonden die 100% herstel van het virus garanderen. Met de juiste geselecteerde behandeling kan de genezing van patiënten echter tot 90% van het aantal gevallen bereiken.

Markers van hepatitis C en interpretatie van de resultaten van kwantitatieve analyse van HCV-RNA

Onlangs, in de zoekmachines van internetbronnen, verschijnt de vraag "kwantitatieve analyse van hepatitis met decodering" steeds vaker.

Inderdaad, het hepatitis-virus is gewoon en gevaarlijk, de ziekte tast de lever aan. De naam kwam van de lat. hepatitis - ontsteking van de lever. Infectie vindt plaats door het bloed of door seksueel contact, volwassenen lopen meer kans om ziek te worden op de leeftijd van 25 tot 50 jaar.

Er zijn verschillende soorten van deze ziekte. Hepatitis C heeft geen levendige expressie, maar in 40-70% van de gevallen gaat het over in een chronische vorm, het kan levercirrose en kanker veroorzaken. Deze ziekte vereist een nauwkeurige diagnose en interpretatie van de verkregen gegevens, waarvoor de methoden worden ontwikkeld. Een daarvan is RNA-analyse van HCV-RNA door PCR.

RNA-analyse van HCV-RNA door PCR

RNA (ribonucleïnezuur) is een soort macromolecule, een van de componenten van een levende cel. RNA is verantwoordelijk voor de codering van genetische informatie. Het hepatitis C-virus bevat een RNA-molecuul en heeft de gewoonte om te muteren. Er zijn zes van zijn subtypen, evenals vele subtypen.

De ziekte in zijn chronische stadium leidt tot fibrose van de lever - bindweefsels groeien, de structuur van het orgaan wordt geleidelijk afgebroken. Fibrose is vatbaar voor tijdige behandeling, omdat de lever nog geen destructieve processen heeft ondergaan. In tegenstelling tot cirrose, een ernstige onomkeerbare leverziekte, waarbij fibrose kan ontstaan ​​zonder tijdig de nodige maatregelen te nemen.

Een persoon met een vermoeden van een hepatitis-virus, bepaalt er antilichamen tegen. Als ze niet aanwezig zijn - ziekte is uitgesloten, in hun aanwezigheid toevlucht tot een methode PTSR (polimeraznoj kettingreactie). In de moleculaire biologie is het experimenteel, maar neemt het een vooraanstaande positie in bij de methoden voor het diagnosticeren van infectieziekten. Met behulp hiervan kan men de concentratie van fragmenten van moleculen in het monster aanzienlijk verhogen. Tien dagen na infectie is RNA al in het bloed te detecteren.

Deze methode is de enige die het mogelijk maakt om de ziekte in de vroege stadia te identificeren. Op andere manieren (bijv. Een biochemische bloedtest) kan dit niet worden gedaan, omdat de lever nog niet is aangetast.

De methode werd in 1993 ontdekt door biochemicus Carrie Mullis, waarvoor hij de Nobelprijs ontving. PCR was een doorbraak in geneeskunde en wetenschap, omdat het een snelle en nauwkeurige identificatie van infecties in het bloed en andere biologische materialen van een persoon mogelijk maakte. Met andere woorden, de methode versnelde de ontwikkeling van de diagnose van infectieziekten.

RNA-analyse van HCV-RNA door PCR is effectief om de volgende redenen:

  • Heeft een goede gevoeligheid - zelfs een kleine hoeveelheid van het virus in het bloed wordt gedetecteerd;
  • het virus zelf wordt bepaald, en geen bijproducten die hierdoor worden veroorzaakt;
  • het type ziekteverwekker wordt bepaald.

Verschillen in de kwantitatieve analyse van HCV-RNA van een kwalitatieve

De PCR-methode omvat twee basismethoden voor het bestuderen van biologisch materiaal voor het zoeken naar het hepatitis C-virus:

Deze studies hebben verschillende taken.

Kwalitatieve analyse van hepatitis met decodering bevestigt de aanwezigheid van het virus nadat de antilichamen tegen de ziekte al in het bloed zijn aangetroffen. Als het onderzoek een positief resultaat opleverde, werd de ziekte gevonden. Met andere woorden, iemand is besmet. Als een negatief resultaat wordt verkregen, betekent dit dat de persoon niet is geïnfecteerd of dat er te weinig concentratie van het virus is. Deze concentratie wordt niet op deze manier gedetecteerd.

Bovendien is het klinische beeld van de ziekte gebaseerd op hepatitis C-markers en interpretatie van de analyse. De belangrijkste markers zijn immunoglobulinen (antilichamen) M en G. Hun aanwezigheid in het bloed van de patiënt duidt op een onkarakteristiek proces voor een gezond organisme. Op basis van de aanwezigheid van deze antilichamen, wordt de patiënt meestal gediagnosticeerd met een primaire diagnose.

Kwantitatieve analyse wordt voorgeschreven voor de initiële detectie van antilichamen en, indien nodig, behandeling.

Ook wordt een kwantitatieve analyse van hepatitis C voorgeschreven voor de detectie van gemengde hepatitis (infectie met verschillende virussen).

De kwantitatieve analyse met decodering wordt uitgevoerd met het doel:

  • verduidelijking van de definitieve diagnose;
  • afstemming van voorspellingen met betrekking tot het verloop van de ziekte en de behandeling ervan - verlenging, vermindering van de behandeling of verandering in tactiek;
  • bewaking van de therapie.

Om ervoor te zorgen dat de resultaten correct zijn, moet u het voorgeschreven schema volgen voordat u bloed geeft:

  • op een lege maag naar het laboratorium komen, de laatste keer dat u voedsel kunt nemen, kan 8 uur voor de ingreep zijn;
  • twee dagen voor de studie zijn alcohol, vet en gefrituurd voedsel verboden;
  • echografie, massage, fysiotherapie voordat de studie niet kan worden uitgevoerd;
  • voor de dag is het ontvangen van medicijnen verboden, als de ontvangst van afzonderlijke geneesmiddelen niet kan worden geannuleerd, wordt dit gemeld vóór de bloedafname;
  • voor de procedure wordt aanbevolen om de fysieke en nerveuze belastingen zo veel mogelijk te verminderen.

Voldoen aan deze vereisten is de sleutel tot het verkrijgen van de juiste resultaten van kwantitatieve analyse voor hepatitis C.

Decodering van kwantitatieve analyse

Na ontvangst van de kwantitatieve analyse-indicatoren is het noodzakelijk om de resultaten van de tests voor hepatitis C te ontcijferen. De resultaten worden zowel in eenheden van ME / ml als in kopieën per ml berekend. Voor het verkrijgen van de resultaten die in de kopie worden vermeld, worden verschillende methoden gebruikt.

  • HCV Monitor (conversiefactor naar ME - 2,7);
  • LCX HCV RNA (de conversiefactor voor ME is 3,8).

Table. Decodering van kwantitatieve analyse van HCV-RNA door PCR.

Analyse van RNA van hepatitis C-virus

"Detectie van genen van hepatitis C-virus (HVC) in het bloed van de patiënt is de tweede fase van de laboratoriumdiagnostiek van deze infectieuze pathologie. Om een ​​middel te detecteren dat geen celmembraan heeft en, dienovereenkomstig, oppervlakte-antigenen, wordt de polymerasekettingreactiemethode gebruikt. Met behulp van deze methode is het direct het molecuul waarin al zijn genetische informatie is gecodeerd - RNA.

RNA - Ribonucleïnezuur, samen met DNA is een deel van de cellen van alle levende organismen. Het hepatitis C-virus bevat een RNA-molecuul en heeft het vermogen om het te muteren.

Een onderzoek naar de aanwezigheid van het HVC-genoom wordt meestal toegediend nadat een algemene, biochemische bloedtest is uitgevoerd en een positieve antilichaamrespons (anti-HVC) is verkregen.

Wat betekent dit?

De test voor antilichamen tegen HVC is screening, dat wil zeggen dat het kan worden gebruikt om grote populaties van mensen te onderzoeken (artsen, zwangere vrouwen, ziekenhuispatiënten, donoren, injecterende drugsgebruikers en met HIV geïnfecteerde personen). Een negatief resultaat van laboratoriumanalyse van anti-HVC suggereert dat er geen immuunrespons op het virus in het bloed van het subject was. In dergelijke gevallen kan een negatief resultaat worden behaald:

Als iemand nog nooit is besmet met hepatitis C.

Als de gevoeligheid van het laboratoriumtestsysteem lager is dan de anti-HVC-concentratie.

Als infectie minder dan 2 maanden geleden heeft plaatsgevonden en anti-HVC in het bloed is nog steeds niet genoeg om te bepalen. Met een vals-negatieve reactie vanwege de menselijke factor.

Als het resultaat wordt verkregen dat antilichamen tegen HVC in de patiënt worden gevonden, betekent dit dat het hepatitis C-virus zich ten tijde van het onderzoek in het lichaam van het subject bevond of enige tijd geleden in het bloed was. Met een positief resultaat op anti-HVC wordt het noodzakelijk om aanvullende laboratoriumtests uit te voeren die het genetische materiaal van het pathogeen zelf detecteren, de concentratie van zijn genen bepalen (virale lading, viremie) en het genotype bepalen.

Analyse voor hepatitis C-virus-RNA

Het HVC-genoom in het laboratorium kan worden gedetecteerd met behulp van verschillende onderzoeken:

vertakt DNA (p-DNA);

transcriptionele amplificatie (TMA);

polymerasekettingreactie (PCR).

De p-DNA-methode is een goedkope en eenvoudige methode voor het detecteren van het virale genoom bij een groot aantal ondervraagde personen. Het grootste nadeel is een lage gevoeligheid: het detecteert HVC alleen in een concentratie boven 500 IU / ml.

De transcriptionele amplificatiemethode detecteert de nucleïnezuren van het virus in het bloedserum. De analyse heeft een hoge gevoeligheid (5-10 IU / ml), maar is nog niet voldoende geïntroduceerd in de alomtegenwoordige laboratoriumpraktijk.

De PCR-methode in Rusland is het meest gebruikelijke en betaalbare laboratoriumonderzoek met hoge gevoeligheid (van 50-60 IU / ml).

De PCR-test wordt uitgevoerd in elk klinisch laboratorium dat over de juiste accreditatie beschikt. Een zeer belangrijke nuance van deze diagnostische methode, die het resultaat van de analyse beïnvloedt, is de gevoeligheid van het testsysteem dat in het laboratorium wordt gebruikt. Bijvoorbeeld, de gevoeligheid van het diagnosticum 60 IE / ml, zoals in de laboratoria Invitro, stelt u in staat om virale RNA 3 maanden na infectie te detecteren. Bij een lage gevoeligheid van het testsysteem kunnen de genen van het pathogeen niet worden gedetecteerd, zelfs niet na 4 maanden na infectie.

RNA van hepatitis C-virus: PCR-methode

De PCR-methode heeft veel voordelen ten opzichte van andere laboratoriumtests voor de detectie van HVC-genen:

hoge gevoeligheid. De methode maakt het mogelijk om het genetisch materiaal van het pathogeen te bepalen, zelfs bij de minimale concentratie in het monster;

grotere specificiteit. Identificeert de genen van een virus van een specifiek genotype onder een verscheidenheid van DNA en RNA van andere pathogenen, wat genotypering van het pathogeen mogelijk maakt;

snelheid uitvoeren. De afwezigheid van een lang proces van cultivering van de ziekteverwekker vermindert de tijd om het resultaat te verkrijgen tot enkele uren; universaliteit van analyse.

De universele procedure voor het onderzoek maakt het gelijktijdig gebruik van één menselijk bloedmonster mogelijk om het genetische materiaal van verschillende pathogenen te detecteren. Deze voordelen maken het mogelijk om PCR te beschouwen als de "gouden standaard" voor laboratoriumdiagnostiek van virale hepatitis C samen met een enzymimmunoassay voor anti-HVC.

PCR is een onderzoek dat wordt gebruikt om de HVC-genen in het bloed van een onderzocht persoon te bepalen. De studie bestaat uit verschillende fasen:

Bemonstering van het biomateriaal.

Vermenigvuldig de concentratie van kopieën van RNA in het geselecteerde monster.

Detectie van genetisch materiaal met behulp van speciale testsystemen.

Na veneuze bloedafname ondergaat de patiënt kunstmatige initiatie van het proces van multipele replicatie (amplificatie, kopie) van HVC-genen.

Voor dit doel verandert de temperatuur in de reageerbuis met het biomateriaal verschillende keren op een bepaalde manier. Wanneer het aantal kopieën van RNA in de buis de vereiste waarde bereikt, wordt het pathogeen gedetecteerd met behulp van speciale test-diagnostieken.

kwaliteit (het detecteert de aanwezigheid van het virus),

kwantitatief (bepaalt de concentratie van virale genen per volume-eenheid)

genotypisch (bepaalt het genotype van de ziekteverwekker).

RNA van hepatitis C: kwalitatieve analyse

De taak van kwalitatieve PCR is om de aanwezigheid van HVC in het gepresenteerde biomateriaal te bepalen. Deze studie wordt meestal uitgevoerd voor het screenen van de diagnose van de ziekte of het identificeren van drager. Toewijzen nadat het door ELISA door anti-HVC is gedetecteerd.

Om hepatitis C te diagnosticeren is het voldoende om genetisch materiaal van HCV kwalitatief te detecteren, dat wil zeggen, zonder de concentratie ervan in het bloedvolume te tellen. Het resultaat van kwalitatieve PCR kan zijn: "RNA gedetecteerd" of "RNA niet gedetecteerd".

De nauwkeurigheid van de methode komt overeen met 95%. Tegelijkertijd bereikt de nauwkeurigheid van de testdiagnostiek zelf 100%, en 5% is de menselijke factor die altijd aanwezig is in laboratoriumstudies. Om vals-negatieve analyse te voorkomen, vooral bij mensen met lage viremie, is een hoge gevoeligheid van het diagnostische systeem dat in het onderzoek wordt gebruikt, noodzakelijk. De gevoeligheid van het testsysteem moet niet minder zijn dan 60 IE / ml.

RNA van hepatitis C: kwantitatieve analyse

Kwantitatieve analyse wordt voorgeschreven wanneer het noodzakelijk is om het niveau van viremie in het menselijk lichaam te kennen. Indicaties voor deze studie zijn:

een positief resultaat van kwalitatieve PCR op voorwaarde dat antilichamen tegen het virus worden gedetecteerd;

het stadium van pathologie vaststellen;

de definitie van virale lading bij hepatitis;

selectie van een combinatie van antivirale geneesmiddelen;

Monitoring van de virale respons op lopende antivirale therapie;

beoordeling van de waarschijnlijkheid van de overgang van acute hepatitis C naar chronisch.

Het resultaat van de analyse wordt uitgedrukt in IE / ml (internationale eenheden in 1 ml serum) of in kopieën / ml (het aantal kopieën van de virusgenen in 1 ml serum). Kwantitatieve PCR heeft geen norm: normaal zou het HVC-gen in menselijk bloed niet gedetecteerd moeten worden. De resultaten van de enquête worden vergeleken met de referentiewaarden die zijn vastgesteld voor een bepaalde mate van virale belasting.

Dus de indicatoren (in IE / ml):

onder 4 × 10 * 5 worden beschouwd als lage viremie;

van 4 × 10 * 5 tot 8 × 10 * 5 - gemiddeld;

meer dan 8 × 10 * 5 - hoog.

Hoe meer kopieën van viraal RNA in het bloed, hoe agressiever de ziekte en hoe groter het risico van overdracht van het virus op anderen. Maar het niveau van virale belasting is niet de enige indicator die de ernst van het verloop van de pathologie en een verdere prognose voor de patiënt beïnvloedt: het genotype van het pathogeen is ook belangrijk.

Het vaststellen van een genotype is noodzakelijk voor het vaststellen van het juiste behandelschema. Het bepaalt ook de prognose voor de gezondheid en het leven van de patiënt. Bijvoorbeeld, virus 3 van het genotype leidt vaak tot fibrose of cirrose van de lever, vergeleken met patiënten die 1 genotype dragen.

Hepatitis C: analyse en interpretatie

RNA diagnose van hepatitis C kan niet alleen op de resultaten van slechts kwalitatieve en / of kwantitatieve PCR analyse worden geplaatst: HVC en het bepalen van viral load is niet voldoende om voldoende antivirale therapie toe. Een potentiële patiënt moet uitvoerig worden onderzocht (klinisch, laboratorium, instrumenteel) om een ​​objectief beeld van de pathologie te krijgen. Correct om een ​​complex van onderzoeken aan te stellen om een ​​diagnose van hepatitis C vast te stellen, en dan correct de resultaten te ontcijferen, kan alleen een arts.

Kwalitatieve analyse van PCR voor hepatitis C

Hepatitis is een ernstige ziekte die veel oorzaken heeft voor het begin. De kern van zijn ontwikkeling is directe of indirecte schade aan de lever. Gezien het belang ervan voor het hele organisme, kan men alleen maar raden hoe slecht de pathologie is. In dit artikel zullen we in meer detail de kenmerken van de cursus en de laboratoriumdiagnose van hepatitis C bespreken.

De oorzaak van de ziekte is een viraal agens, dat verwijst naar RNA-bevattende pathogenen. Het heeft een onderscheidend kenmerk: het vermogen om te muteren, dat wil zeggen de structuur ervan te veranderen. Door deze infectie ontsnapt de aanval van het immuunsysteem en leidt in de meeste gevallen tot chronische ontsteking in de lever.

Gezien het bestaan ​​van verschillende subtypes van het virus, dient de selectie van geneesmiddelen te worden uitgevoerd met inachtneming van de resultaten van genotypering. Ondanks een lange studie van de ziekte en eigenaardigheden van de structuur van HCV, was het niet mogelijk om een ​​specifiek vaccin tegen de ziekte te ontwikkelen.

De problemen van een vroege diagnose zijn het asymptomatische verloop van hepatitis, met als gevolg dat iemand zich in het stadium van cirrose tot een arts wendt. Om de ziekte tijdig op te sporen, zijn regelmatige fysieke onderzoeken vereist. Alleen door laboratoriumtesten van bloed kan HCV worden geïdentificeerd en infectie van anderen worden voorkomen. Het feit dat de drager van de infectie lange tijd niet weet van de pathologie en het virus blijft overdragen aan gezonde mensen.

Transmissiepaden

Het virus verspreidt zich in de meeste gevallen door het bloed, omdat het de grootste concentratie van pathogene agentia bevat. Zo wordt de infectie overgedragen:

  • met hemodialyse;
  • bij het prikken met een naald;
  • in de loop van het gevecht, wanneer de huid gewond is en hemocontact optreedt;
  • met bloedtransfusie (bloedtransfusie).

De waarschijnlijkheid van een infectie met intieme intimiteit is onbeduidend, omdat sperma en vaginale afscheiding een klein aantal pathogenen bevatten. Het risico op infectie neemt aanzienlijk toe als de integriteit van het genitaal slijmvlies wordt aangetast. Dit wordt waargenomen bij agressieve en anale seks.

Wat betreft de verticale modus van transmissie van infectie, wordt het uitgevoerd in de loop van de bevalling. In de periode van de zwangerschap kan de ziekteverwekker de placenta niet naar het embryo doordringen. Bij natuurlijke soorten wordt het pathogene agens overgedragen aan het kind bij een trauma van zijn huid wanneer contact met bloed van moeder wordt waargenomen.

Na penetratie van het pathogeen in een gezond organisme begint de synthese van antilichamen, die bescherming tegen infectie zijn en tot immuunstructuren behoren. Ze worden gevonden tijdens de eerste studie van een persoon met behulp van ELISA.

Om de diagnose te bevestigen, ondergaat de patiënt een polymerasekettingreactie. Het is een analyse om het genetische materiaal van een pathogeen agens te identificeren en om de virale last te bepalen.

Laboratoriumdiagnose hepatitis C

Laboratoriumdiagnostiek begint met een enzymimmunoassay. Zijn hoofdtaak is om antilichamen te detecteren die tegen de ziekteverwekker zijn geproduceerd. De efficiëntie is bijna 95%. Dankzij dit onderzoek in het preklinische stadium is het mogelijk om de virusdrager te identificeren en voor verder onderzoek te verzenden.

Kwalitatieve analyse van ELISA geeft de aanwezigheid of afwezigheid van immunoglobulinen in het bloed van de patiënt aan. Het resultaat kan "positief" of "negatief" zijn. Nadat de eerste variant van het antwoord is ontvangen, gaat de persoon naar het volgende onderzoek - PCR. De prijs is afhankelijk van de kwaliteit van de reagentia en het laboratorium. De kosten van een polymerasekettingreactie kunnen 4000 roebel bedragen.

Kenmerken van PCR

Met de polymerasekettingreactie maakt zelfs een kleine hoeveelheid biologisch materiaal het mogelijk om de virale lading in het bloed te schatten, dat wil zeggen om de concentratie van pathogenen in één milliliter vloeistof te berekenen.

Met de komst van PCR was de diagnose van hepatitis veel eenvoudiger. De analyse maakt het mogelijk om HCV RNA te identificeren, om het stadium van het infectieuze proces en de infectiviteit van de virusdrager vast te stellen.

Er zijn verschillende soorten genetische diagnose:

  1. kwalitatieve analyse van PCR voor hepatitis C - bevestigt de aanwezigheid of afwezigheid van HCV in het bloed van de onderzochte:
  2. kwantitatief, waardoor het mogelijk is de concentratie van virussen te berekenen en het stadium van de ziekte vast te stellen. Het resultaat wordt gegeven in IE / ml of kopieën / ml (afhankelijk van het laboratorium);
  3. genotypering is noodzakelijk om het genotype van HCV te bepalen. Dit is nodig voor een nauwkeurige selectie van geneesmiddelen die in dit geval het meest effectief is. De analyse geeft indirect de ernst van het pathologische proces in de lever aan. Met het derde genotype van het pathogeen wordt steatose het vaakst waargenomen, waarvan de ontwikkeling de accumulatie van vet in de hepatocyten (zijn cellen) is. Bovendien beïnvloedt het type virus het resultaat en de duur van het therapeutische verloop.

Kwalitatieve analyse van PCR voor hepatitis C

De eerste stap in het laboratorium is het bestuderen van het biologische materiaal voor de aanwezigheid van HCV-RNA. Het is belangrijk om te onthouden dat een kwalitatieve analyse voor hepatitis C een bepaald gevoeligheidsniveau heeft en daarom niet altijd het juiste antwoord kan geven. In dit geval wordt het aanbevolen om een ​​herhaalde laboratoriumdiagnose uit te voeren met behulp van andere reagentia.

Voor het verkrijgen van betrouwbare resultaten moet een testsysteem met een gevoeligheid van ten minste 50 IE / ml worden gebruikt.

Het resultaat van de diagnose kan "positief" of "negatief" zijn. Als de ziekteverwekker niet in het bloed wordt aangetroffen, eindigt de studie. Wanneer een pathogeen agens in het monster wordt gedetecteerd, wordt vervolgens een kwantitatieve telling van de virale lading uitgevoerd.

Een vals-negatief antwoord wordt verkregen wanneer het technologische proces wordt verstoord, bijvoorbeeld actieve componenten die de constructie van kopieën van de ziekteverwekker in de omgeving binnendringen. Het is dus niet mogelijk om de ware afbeelding van het bloed weer te geven, waardoor de menselijke infectie niet wordt gediagnosticeerd.

Een vals-positief resultaat kan worden verkregen als de verzamelbuis voor biologisch materiaal, evenals de omgeving voor het onderzoek, is verontreinigd. Bovendien is een dergelijke analyserespons mogelijk met een gemengde infectie, wanneer de lever wordt beïnvloed door verschillende virussen, bijvoorbeeld hepatitis C en D.

Indicaties voor kwalitatief onderzoek

Een arts kan een kwalitatief onderzoek aan een patiënt toewijzen voor de detectie van hepatitis C-virus-RNA:

  • bij ontvangst van een positieve of dubieuze reactie van de enzymimmunoassay;
  • voor verificatie van de diagnose;
  • bepaling van virale lading;
  • enscenering van het stadium van de ziekte;
  • diagnose van gemengde infectie. Vaak beïnvloedt hepatitis C de lever op hetzelfde moment als het "D" -virus;
  • bepaling van therapeutische tactieken waarbij rekening wordt gehouden met het genotype van de ziekteverwekker;
  • beoordeling van de dynamiek van veranderingen tegen de achtergrond van de behandeling met antivirale geneesmiddelen.

De voordelen van een polymerasekettingreactie omvatten:

  1. hoge gevoeligheid van de techniek, die het mogelijk maakt om het feit van infectie vast te stellen in het preklinische stadium;
  2. identificatie van het genetische materiaal van het pathogeen, en niet van antilichamen;
  3. de mogelijkheid om een ​​subtype van een pathogeen agens in te stellen;
  4. hoge diagnostische snelheid, omdat het niet nodig is om materiaal op een voedingsbodem te zaaien, maar het is voldoende om specifieke testsystemen te gebruiken. Een persoon krijgt na 5 uur een resultaat;
  5. veelzijdigheid. De analyse maakt het mogelijk om genetisch materiaal (RNA, DNA) te identificeren. Hierdoor kan de arts hepatitis C en andere soorten aandoeningen bevestigen (B);
  6. de mogelijkheid om een ​​latente infectie te detecteren.

Kwantitatief onderzoek

In de studie van bloed met een polymerase kettingreactie, is het mogelijk om het aantal pathogenen in een vast volume biologisch materiaal te berekenen. De indicator wordt weergegeven in IE / ml. Door de analyse is het mogelijk om de mate van infectiviteit van de patiënt vast te stellen, om het stadium van het infectieuze proces te bepalen en om de effectiviteit van medicamenteuze therapie te evalueren.

Op basis van PCR beslist de expert welke doseringen van geneesmiddelen de verspreiding van pathogenen kunnen blokkeren. Bovendien worden de duur van de antivirale behandeling en de prognose voor het leven bepaald. Het is belangrijk om te onthouden dat de testsystemen zeer gevoelig zijn, dus de methode maakt het mogelijk om menselijke infecties te bevestigen, zelfs in het preklinische stadium.

genotypering

Gezien het vermogen van de veroorzaker om te muteren, om de tactiek van de behandeling en de keuze van antivirale geneesmiddelen te bepalen, is het genotype ervan nodig. De behandeling van hepatitis HCV 1 duurt bijvoorbeeld 48 weken, met een positieve trend die slechts in 60% van de gevallen wordt waargenomen. Genotypen 2 en 3 hebben een gunstiger prognose. Antivirale middelen worden 8 maanden voorgeschreven en hun effectiviteit bereikt 85%.

Volgens statistische gegevens zijn HCV 1, 2 en 3 in de meeste gevallen geregistreerd op het grondgebied van de Russische Federatie.

Bij het ontcijferen van een laboratoriumonderzoek kan een dergelijk antwoord worden aangegeven - "niet ingetypt". Dit betekent dat er een virus circuleert in de bloedsomloop van de patiënt, wat niet kan worden herkend door het testsysteem. Het resultaat van de analyse in dit geval geeft de infectie aan van een persoon die atypisch is voor een bepaald geografisch gebied van de veroorzaker.

Hoe betrouwbare resultaten te krijgen?

Om kwalitatief onderzoek van PCR op de detectie van RNA van het veroorzakende agens van hepatitis C de juiste resultaten te laten zien, is het noodzakelijk om te voldoen aan de vereisten voor voorbereiding op laboratoriumdiagnostiek:

  1. bloedafname wordt uitgevoerd op een lege maag en de "hongerige" opening mag niet korter zijn dan 8 uur;
  2. twee dagen voor het onderzoek wordt aanbevolen om te stoppen met alcohol te drinken en te weigeren van scherpe, vette en gerookte gerechten;
  3. afschaffen van de introductie van geneesmiddelen die de bloedstolling verminderen, zoals heparine. Als deze medicijnen om levensredenen worden voorgeschreven, moet u dit aan de arts melden. Bovendien moet de specialist op de hoogte zijn van de toelating van andere geneesmiddelen die het resultaat van een laboratoriumtest kunnen beïnvloeden;
  4. Aan de vooravond van de verzameling van biologisch materiaal mogen fysiotherapeutische procedures niet worden uitgevoerd en onderworpen aan zware fysieke inspanning.

De resultaten van de analyse kunnen niet alleen worden beïnvloed door de persoon die bloed doneert, maar ook door andere factoren, namelijk:

  • slechte bloedafname;
  • niet-naleving van aanbevelingen voor het transport van biologisch materiaal;
  • onvoldoende training van laboratoriummedewerkers;
  • niet-naleving van onderzoekstechnieken;
  • de introductie van anticoagulantia (heparine) aan de vooravond van bloedafname. Deze groep geneesmiddelen vermindert de coaguleerbaarheid, waardoor het werk van reagentia wordt vertraagd.

In verschillende laboratoria kan de diagnostische respons enigszins afwijken, maar deze fouten hebben geen invloed op het eindresultaat van het onderzoek.

Bijzondere aandacht wordt besteed aan de soorten testsystemen die in het laboratorium worden gebruikt. Dikwijls wordt de voorkeur gegeven aan reactanten met hoge gevoeligheid. Dit is belangrijk voor patiënten met lage virale lading, omdat het moeilijk te detecteren is.

Hoe vaak wordt een laboratoriumtest uitgevoerd?

In de eerste plaats wordt de polymerase-kettingreactie uitgevoerd bij mensen die zijn getest op antilichamen tegen het hepatitis-virus bij immunoassay. In dit geval is het aangewezen om het feit van infectie van een persoon te bevestigen en het stadium van de ziekte vast te stellen. Bovendien kunt u met de analyse het subtype van het virus bepalen, wat met name belangrijk is voor de selectie van geneesmiddelen.

De volgende periode voor verplichte laboratoriumtests is 3 maanden vanaf het begin van de antivirale therapie. Diagnose biedt de mogelijkheid om de effectiviteit van geneesmiddelen te evalueren, de dosis aan te passen of te vervangen.

Naast de basisanalyses kan de PCR bovendien 4 en 24 weken na het begin van de behandeling worden uitgevoerd. Een positieve prognose van de ziekte wordt bevestigd door een afname van de virale lading na drie maanden therapie. Het moet dus bijvoorbeeld dalen van 1 miljoen IE / ml tot enkele honderdduizenden.

Als de concentratie van pathogene agentia in het bloed op hetzelfde niveau blijft of iets toeneemt, duidt dit op de ineffectiviteit van antivirale middelen en moet deze worden vervangen. Met behulp van PCR aan het einde van de behandeling is het mogelijk om het herstel van de patiënt te bevestigen.

Om de resultaten van laboratoriumdiagnostiek goed te kunnen interpreteren, is raadpleging van een hepatoloog of specialist in infectieziekten vereist. Gezien de hoge incidentie van valse responses voor ELISA, wordt de analyse uitsluitend gebruikt voor primaire screening. Voor een grondiger onderzoek van de patiënt wordt een polymerasekettingreactie gebruikt.

Kan hij genezen worden van hepatitis C zonder bijwerkingen?

Vandaag zal modern drugs en de nieuwe generatie sofosbuvir Daklatasvir met 97-100% waarschijnlijk voor altijd genezen van hepatitis C. De nieuwste medicatie is beschikbaar in het Russisch bij de officiële vertegenwoordiger van de Indiase farmgiganta Zydus Heptiza. De bestelde producten worden binnen 4 dagen geleverd door de koerier, betaling na ontvangst. Ontvang gratis advies over het gebruik van moderne middelen, evenals informatie over hoe u de officiële website van Zydus leverancier kunt kopen in Rusland.

Kwalitatieve analyse voor hepatitis C

Laat een reactie achter

Kwalitatieve analyse van polymerasekettingreactie - PCR voor hepatitis C bepaalt de aanwezigheid of afwezigheid van HCV in het lichaam. In het laboratorium wordt de structuur van het RNA bestudeerd, waarin het virus zich zal bevinden. Als een virus C wordt gedetecteerd, is het noodzakelijk om een ​​behandeling te ondergaan, omdat een verwaarloosde leveraandoening ernstige gevolgen heeft. Kwalitatieve PCR wordt uitgevoerd na herstel om de afwezigheid van antilichamen te bevestigen. Benoemd en voor preventief onderzoek. Bij een lage concentratie van het pathogeen in het bloed kan PCR (kwalitatief) niets detecteren, omdat het diagnosesysteem zijn gevoeligheidsdrempels heeft. In het geval van een eerste stadium van de ziekte of een milde vorm, wordt de PCR uiteindelijk gediagnosticeerd met ultragevoelige apparatuur.

Wat is een RNA-virus?

De term RNA van hepatitis C-virus (of hepatitis C-virus-RNA) wordt zelf leverziekte genoemd. Virus C bindt zich aan een gezonde lichaamscel en dringt binnen. Na verloop van tijd, verspreid door het lichaam, is het alleen om in het bloed te komen. Het gevolg is dat de ziekteverwekker de lever binnendringt, zich vermengt met zijn cellen en hard werkt. Levercellen (hepatocyten) werken onder zijn invloed, ondergaan veranderingen en gaan ten onder. Hoe langer het virus C in de lever zit, hoe meer cellen afsterven. Na verloop van tijd ontwikkelen zich gevaarlijke ziektes die leiden tot kwaadaardige degeneratie en dood.

Infectie van de lever met dit type virus kan op geen enkele manier extern worden gemanifesteerd. Gedurende vele of tientallen jaren voelt de geïnfecteerde persoon zich volledig gezond en alleen een onderzoek per ongeluk onthult meestal een pathologie. Bij het doneren van bloed voor hepatitis wordt een deel van de RNA (ribonucleïnezuur) keten die deel uitmaakt van het menselijke gen (DNA) onderzocht. De resultaten van laboratoriumonderzoek mogen niet worden gebruikt voor zelfbehandeling, omdat dit slechts een indicator is. De arts zal het exacte beeld en de verdere diagnose bepalen.

Wanneer gedaan: getuigenis van de studie

Om de HCV te bevestigen, wordt PCR-analyse (polymerasekettingreactie) toegewezen. PCR-onderzoeken helpen bij het vinden van het pathogeenmateriaal in de RNA-structuur en schrijven effectieve therapie voor. Benoemd in de volgende gevallen:

  • identificatie van tekenen van leverontsteking;
  • screeningstudies voor preventie;
  • onderzoek van contactpersonen;
  • diagnose van hepatitis van gemengde oorsprong (definitie van de belangrijkste ziekteverwekker);
  • Bepaling van het niveau van activiteit van virusreproductie in chronische vorm;
  • cirrose van de lever;
  • om de effectiviteit van de voorgeschreven behandeling te bepalen.
PCR-onderzoeken worden door een arts toegewezen om de effectiviteit van het verloop van de behandeling van hepatitis te bepalen.

Er is zowel een kwalitatieve als een kwantitatieve analyse van PCR. Kwantitatieve PCR toont het percentage RNA met de dragers van het virus in het bloed en de kwalitatieve PCR geeft een virale aanwezigheid of afwezigheid aan. Een positieve indicator van kwaliteit (de aanwezigheid van hepatitis C-RNA) vereist ook een kwantitatief onderzoek. Een hoog concentratieniveau van de pathogeen van hepatitis C hangt samen met het risico van overdracht, dat wil zeggen besmetting van anderen. Lage hoeveelheden worden beter behandeld. De hoeveelheid RNA-virussen in het bloed is niet gerelateerd aan de intensiteit van de ziekte. De PCR-analyse wordt ook uitgevoerd in het geval van interferon-therapie, om de duur en de complexiteit van de behandelingskuur voor te schrijven.

Kenmerken van kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C

Een kwalitatieve analyse met een polymerasekettingreactie-index wordt toegekend aan alle patiënten die antilichamen tegen hepatitis C in hun bloed hebben. Wie hersteld en hersteld is, moet opnieuw worden getest. Aanbevolen wordt om getest voor hepatitis B en vervolgens, bij een positieve afsluiting, en hepatitis D ook kwalitatief geanalyseerd reakatsiya dient in samenhang met andere bloedonderzoeken worden uitgevoerd. Analyses zullen een compleet beeld geven van de virusverspreiding.

Uit de testresultaten zal alleen een positieve test voor hepatitis C of negatief, dat wil zeggen de aanwezigheid of afwezigheid van het virus, worden gezien. Als de conclusie "wordt gedetecteerd", is en blijft het virus actief acteren. De aanduiding "niet gevonden" geeft de afwezigheid van het virus of de kleine hoeveelheid aan. Met deze indicator moet rekening worden gehouden met het feit dat de analytische gevoeligheid van diagnostische systemen anders is en dat RNA-hepatitis C nog steeds in het bloed kan zijn, maar niet in de analyse kan voorkomen.

Een bijzonder gevoelige methode van PCR ultra-hepatitis C onthult zelfs in kleine hoeveelheden. Een hybridisatie-fluorescente studie wordt gebruikt die vele malen hoger is dan standaard PCR-systemen. De methode wordt in verschillende gevallen gebruikt:

  • verdachte verborgen vormen van hepatitis C;
  • De diagnose van PCR werd niet bevestigd door het pathogeen, maar er zijn antilichamen;
  • in geval van herstel;
  • om het vroege stadium van infectie te identificeren.
Terug naar inhoud

Toelichting op de analyse

De uiteindelijke beslissing in de diagnose wordt beïnvloed door PCR-decodering van HCV, in het bijzonder met ultramethode. Het belangrijkste nadeel van dit onderzoek is de strikte naleving van steriele omstandigheden voor het monster en de materialen. Een kleine afwijking vertoont soms onnauwkeurige conclusies van de analist, compliceert de diagnose en daaropvolgende behandeling. Analyse van PCR voor de bepaling van RNA van hepatitisvirus toont niet altijd het beeld van de ziekte met vertrouwen, soms worden onnauwkeurigheden toegelaten, op beide manieren.

Bij het diagnosticeren van het hepatitis-virus wordt aanbevolen een uitgebreid onderzoek uit te voeren.

Norm van indicatoren

De afwezigheid van JgM-antilichamen tegen RNA bij virale hepatitis C wordt beschouwd als de norm bij de analyse van de polymerasekettingreactie. Tegelijkertijd wijzen de bevindingen van serologische analyse op de aanwezigheid van antilichamen tegen het virus C en dit ligt ook binnen de grenzen van de norm. Een kwalitatieve definitie toont niet de intensiteit van de ziekte, het onthult alleen de veroorzaker van hepatitis C in RNA. Een dergelijke analyse wordt na de behandeling herhaald om het daadwerkelijke herstel te bevestigen.

afwijkingen

Als JgM-antilichamen tegen HCV-RNA aanwezig zijn, duidt dit op een zich ontwikkelende infectie. De ziekte is acuut of chronisch, manifesteert zich in verschillende stadia. Als een afname van het aantal antilichamen wordt geregistreerd, geeft de analyse aan dat de resultaten van de behandeling tijdens het herstel zijn behaald. Er zijn uiterst zeldzame gevallen van vals positieve bevindingen in de diagnose. Ze zijn te vinden bij vrouwen tijdens de zwangerschap en bij mensen met andere besmettelijke ziekten.

Diagnose van het hepatitis C-virus

Hepatitis C-virus (HCV) is een RNA-bevattend virus uit de Flaviviridae-familie. Deze infectie kan zich voortplanten in bloedcellen (monocyten, neutrofielen, B-lymfocyten en macrofagen) en ook de cellen van de lever zelf beschadigen - hepatocyten. Vanwege de hoge mate van mutatieactiviteit kan dit type hepatitis de impact van het menselijke immuunsysteem voorkomen.

Er zijn 11 genotypes en een massa subtypen van een dergelijk virus die verschillen in de mate van leverschade en de timing van de hepatitisbehandeling beïnvloeden. Een dergelijke verscheidenheid van hepatitis C vereist verschillende methoden van antivirale therapie. Hepatitis van de 1e en 4e genotypen moet bijvoorbeeld 48 weken worden behandeld en voor een kuur tegen virussen van de 2e en 3e soort, kan dit slechts 24 weken duren.

Nadat de snelle test voor hepatitis C een positief resultaat gaf, werd PCR-analyse uitgevoerd om het RNA van het virus in bloedmonsters te identificeren.

PCR-diagnose

Polymerase-kettingreactie (PCR) is een experimentele techniek voor het detecteren van virussen. Een dergelijke analyse voor hepatitis C maakt een significante toename van de concentratie van sommige fragmenten van DNA- of RNA-virus in de ingediende monsters mogelijk. Dit maakt het mogelijk om ze te herkennen en zelfs het aantal te tellen.

Deze test voor hepatitis C wordt uitgevoerd volgens de volgende procedure:

  1. Een bloedmonster (genetisch materiaal), dat het gewenste hepatitis-gen kan bevatten, wordt in een reageerbuis ingebracht. Om haar plaats speciale stoffen - primers, ze zijn segmenten van een korte lengte van het gewenste gen, die chemisch worden gesynthetiseerd. In dit vat wordt ook DNA- of RNA-polymerase toegevoegd, het is in staat ketens van nucleïnezuur te bouwen, volledig identiek aan het oorspronkelijke. Aan de verkregen samenstelling wordt een selectie van vrije nucleotiden toegevoegd, die een speciaal bouwmateriaal zijn voor DNA en RNA, waarvan er één minuscule deeltjes radioactief fosfor bevat.
  2. Het resulterende mengsel wordt eerst verwarmd tot 95 graden, waardoor in de normale toestand wordt verweven, beide DNA-helixen worden verzwakt vanwege dit effect.
  3. Om de analyse voort te zetten, koelt het medicijn af, op dit punt worden de primers gehecht aan het gewenste gebied van het hepatitisvirusgenoom, waardoor het DNA zich niet in een dubbele helix kan vormen. Wanneer het mengsel afkoelt, zoekt het polymerase naar enkele strengen nucleotiden. Tijdens de aanhechting van dit enzym glijdt het langs de DNA-streng (zoals een blok door een touw), en op een dubbele helix kan het niet "werken", voor dit doel wordt het mengsel verwarmd.
  4. Om de analyse te verlengen, wordt het opnieuw verwarmen uitgevoerd, wat weer leidt tot de scheiding van de nucleotide-ketens. Bij het uitvoeren van dergelijke cycli van PCR in een monster van onbekende hoeveelheid van het hepatitis gen toename geometrische verhoudingen en andere genetische materialen worden bereid (gevormd) in een lineair patroon.
  5. Om de studie te voltooien, wordt de oplossing gezuiverd van resterende nucleotidedeeltjes. Ze worden gescheiden door elektroforese, met de scheiding van moleculaire DNA-ketens door de parameters van het molecuulgewicht. Dergelijke tests voor hepatitis met behulp van PCR maken het mogelijk om te bepalen of de gewenste genen van het virus aanwezig zijn in het testmonster of niet.

Het voordeel van deze test is de zeer hoge gevoeligheidsdrempel van de PCR-reactie. Een dergelijke techniek voor het uitvoeren van diagnostiek vereist idealiter slechts één genoom van het virus voor het gehele monster.

Bovendien is een dergelijke PCR volledig specifiek. In elk van de genen is er een unieke reeks nucleotiden, die net als een vingerafdruk nergens kunnen worden herhaald. Voor deze hepatitis C-analyse worden primers zo gesynthetiseerd dat ze absoluut overeenkomen met de unieke delen van de gewenste genen die geen andere sequentie heeft.

Deze techniek maakt het ook mogelijk om hepatitis in c te analyseren en te bepalen, wat helpt om een ​​definitieve diagnose te stellen.

Een dergelijke laboratoriumanalyse maakt het mogelijk om meer informatie te verkrijgen dan alleen de aanwezigheid of afwezigheid van HCV-RNA of een ander type in bloedmonsters. Door de parameter van radioactieve straling te definiëren, is er ook de mogelijkheid om te onthullen hoeveel het gewenste genetische materiaal oorspronkelijk in het onderzochte monster was gevonden. Hiermee kunnen we de parameter van de zogenaamde virale belasting bepalen - de concentratie van hepatitis-RNA-deeltjes in een bepaald volume.

Kwalitatieve PCR-analyse

Deze analyse maakt het mogelijk de aanwezigheid van het hepatitis-virus in bloedmonsters te bepalen. Het moet worden gedaan voor alle mensen waarvan is vastgesteld dat ze antilichamen tegen hepatitis hebben.

Als resultaat van een dergelijke studie kunnen er slechts twee waarden zijn:

  • "Gevonden". Een dergelijk positief testresultaat wordt als volgt geïnterpreteerd: fragmenten van het hepatitis-virus-RNA werden gevonden in het geanalyseerde monster uit biologisch materiaal. Hieruit volgt dat er een feit van besmetting van de patiënt met dit virus was. Dit kan erop duiden dat de veroorzaker van hepatitis zich vermenigvuldigt in het lichaam en nieuwe cellen infecteert, waardoor de lever wordt vernietigd.
  • "Niet gedetecteerd". Dit resultaat geeft aan dat het monster dat wordt geanalyseerd in het laboratorium, bleken fragmenten van RNA, dat specifiek is voor het hepatitis C-virus Er is ook een mogelijkheid dat de concentratie van RNA virus-pathogeen in het monster zo klein dat de test niet kunnen identificeren. In dergelijke gevallen wordt gezegd dat het concentratieniveau onder de gevoeligheidsdrempel van de test ligt.

Een dergelijke test kan ook een valspositieve of negatief zijn door vervuiling van het biologische materiaal of de aanwezigheid van bepaalde stoffen in monsters, reageren met de chemische componenten noodzakelijk voor de analyse.

Er moet worden benadrukt dat in acute fasen van hepatitis C een kwalitatief onderzoek met behulp van de PCR-methode zijn RNA kan detecteren na slechts 1-2 weken vanaf het moment van infectie van het lichaam. Dit betekent dat de ziekte kan worden geïdentificeerd lang voordat het uiterlijk van de externe symptomen of het uiterlijk van antilichamen tegen hepatitis in het lichaam.

Bloedafname (uit de ader) wordt bij voorkeur uitgevoerd op een lege maag.

Kwantitatieve analyse van PCR

Bepaal met behulp van deze analyse het concentratieniveau van het hepatitis-virus bij de patiënt (virale last). Een dergelijke test moet worden ingediend om de hoeveelheid RNA van het virus in een eenheid van een bepaald volume te schatten.

De analyse van de tests voor hepatitis c, uitgevoerd met deze techniek, kan de volgende resultaten hebben:

  • Kwantitatieve indicator (in cijfers)

De concentratie van het virus (aantal) wordt gegeven in numerieke termen. Hiertoe worden verschillende eenheden gebruikt: hetzij ME / ml (internationale eenheid per milliliter) of kopieën / ml (het aantal kopieën van het RNA van het virus in milliliter). Gemiddeld komt 1 IE / ml overeen met 4 kopieën / ml, omdat verschillende testsystemen voor dergelijke eenheden verschillende conversiefactoren hebben.

De lage virale lading wordt als minder dan 400.000 IU / ml voor deze test beschouwd en de hoge is 8000000 IU / ml.

Deze kwantitatieve beoordeling maakt het mogelijk het besmettingsniveau van de ziekte ("infectiousness") van de patiënt te bepalen. Hoe meer deze indicator van analyse, hoe groter het risico van overdracht van de ziekteverwekker op andere mensen (met seksueel contact of een verticale route).

Dit vonnis betekent dat de kwantitatieve methode hepatitis-RNA niet kon detecteren, maar het virus zelf is alleen in een zeer lage concentratie in het lichaam aanwezig. Dit werd bevestigd door een aanvullende kwalitatieve analyse van PCR uit te voeren, en zijn positieve resultaat geeft de aanwezigheid van hepatitis aan.

  • Resultaat "Niet gedetecteerd"

    Deze positieve interpretatie van de analyse suggereert dat de kwantitatieve test zelf in het bloedmonster geen specifieke RNA-deeltjes van het hepatitis C-virus kon detecteren.

  • Kwantitatieve PCR-analyse uitgevoerd in verschillende stadia van antivirale therapie (1e, 4e, 12e en 24e weken) geeft een indicatie van de effectiviteit van de behandeling en de nodige correcties aan te brengen.

    Specificiteit van de analyse

    Deze test moet worden ingediend om de verschillende genotypen van hepatitis C te bepalen. Momenteel zijn 11 genotypen van dit pathogeen bekend en veel subtypen. Genotypen van hepatitis C van de 1e, 2e en 3e soort komen veel voor in ons land. 1a, 1b, 2a, 2b of 3, 4, 5, 6 genotypen diverse modificaties subtypen: in laboratoria kunnen verschillende subtypen van deze soorten te detecteren. Voor al deze hepatitis is de specificiteit van detectie 100%.

    Verduidelijking van de modificatie van het genotype maakt het mogelijk om een ​​geschikte behandeling te selecteren. De aanwezigheid van een bepaald type genotype bij de patiënt geeft niet aan dat de ziekte gemakkelijker of moeilijker is, het zijn alleen varianten van het hepatitis-virus en niet meer.

    In die gevallen waarin het laboratorium het genotype van het virus niet kan isoleren, kan een resultaat worden gegeven: "Het is niet getypt. Genotypes werden bestudeerd: dergelijke en dergelijke (bijvoorbeeld la, 2b, 3av). Dit transcript geeft aan dat er geen overeenkomstige reagentia in dit laboratorium waren die het genotype van het hepatitis-virus konden bepalen. In de studie werd een controle uitgevoerd voor de virussen die in de lijst werden vermeld, maar hun overeenkomst met RNA-monsters werd niet gedetecteerd.

    Om een ​​definitieve diagnose te stellen, is slechts één soort analyse onvoldoende. Elk van de tests kan een vals positief resultaat opleveren. Een complexe studie wordt uitgevoerd om het exacte type hepatitis en de mate van infectie met deze infectie van het lichaam te bepalen. Tegelijkertijd wordt een leverbiopsie en het testen van de enzymen ervan uitgevoerd: ALAT, ASAT, evenals alkalische fosfatase en LDH. Een bilirubinetest en protrombine-indexanalyse kunnen ook worden uitgevoerd.

    Alleen een complex van dergelijke tests en laboratoriumtests, met een algemene analyse van de toestand van de patiënt, zal helpen bij het bepalen van de aanwezigheid van hepatitis in het lichaam, de vorm en de mate van ernst. Op basis hiervan kan de arts de verdere behandeling bepalen en een mogelijke prognose voor de patiënt maken.


    Gerelateerde Artikelen Hepatitis