Hepatitis C-virus (HCV), antigenen cor, NS3, NS4, NS5, IgG-antilichamen

Share Tweet Pin it

De nederlaag van de lever door een type C-virus is een van de acute problemen van infectieziekten en hepatologie. Voor de ziekte, een kenmerkende incubatieperiode op lange termijn, gedurende welke er geen klinische symptomen zijn. Op dit moment is de drager van HCV het gevaarlijkst, omdat het niet bekend is met de ziekte en gezonde mensen kan infecteren.

Voor het eerst werd het virus besproken aan het einde van de 20e eeuw, waarna de volledige studies begonnen. Tegenwoordig kennen we de zes vormen en een groot aantal subtypes. Deze variabiliteit van de structuur is te wijten aan het vermogen van het veroorzakende agens om te muteren.

De kern van de ontwikkeling van het infectieuze en inflammatoire proces in de lever is de vernietiging van hepatocyten (zijn cellen). Ze worden vernietigd onder de directe invloed van een virus dat een cytotoxisch effect heeft. De enige kans om een ​​pathogeen agens in het preklinische stadium te identificeren, is de laboratoriumdiagnose, waarbij het gaat om het zoeken naar antilichamen en de genetische set van het virus.

Wat zijn hepatitis C-antilichamen in het bloed?

Het is moeilijk voor een persoon die ver van de geneeskunde is om de resultaten van laboratoriumonderzoeken te begrijpen zonder een idee te hebben van antilichamen. Het is een feit dat de structuur van het pathogeen bestaat uit een complex van eiwitcomponenten. Na penetratie in het lichaam veroorzaken ze een reactie van het immuunsysteem, alsof ze het irriteren door hun aanwezigheid. Aldus begint de productie van antilichamen tegen hepatitis C-antigenen.

Ze kunnen van verschillende soorten zijn. Vanwege de evaluatie van hun kwalitatieve samenstelling slaagt de arts erin menselijke infecties te vermoeden, evenals om het stadium van de ziekte vast te stellen (inclusief herstel).

De primaire methode voor het detecteren van antilichamen tegen hepatitis C is een enzymimmuuntest. Het doel is om specifiek Ig te vinden, dat wordt gesynthetiseerd als reactie op de infiltratie van de infectie in het lichaam. We merken op dat ELISA iemand toestaat de ziekte te vermoeden, waarna een verdere polymerasekettingreactie vereist is.

Antistoffen blijven zelfs na volledige overwinning op het virus voor het leven in het menselijke bloed en getuigen van het contact in het verleden van de immuniteit met de ziekteverwekker.

Fasen van ziekte

Antilichamen tegen hepatitis C kunnen wijzen op het stadium van een infectieus-inflammatoir proces, waardoor de specialist effectieve antivirale geneesmiddelen kan kiezen en de dynamiek van veranderingen kan volgen. Er zijn twee fasen van de ziekte:

  • latent. De persoon heeft geen klinische symptomen, ondanks het feit dat hij al een virusdrager is. Tegelijkertijd zal de antilichaam (IgG) -test voor hepatitis C positief zijn. Het niveau van RNA en IgG is klein.
  • acuut - gekenmerkt door een toename van de titer van antilichamen, in het bijzonder IgG en IgM, hetgeen duidt op een intensieve vermenigvuldiging van pathogenen en ernstige vernietiging van hepatocyten. Hun vernietiging wordt bevestigd door de groei van leverenzymen (ALT, AST), die wordt onthuld door biochemie. Bovendien wordt RNA van een pathogeen middel in een hoge concentratie gedetecteerd.

Positieve dynamiek op de achtergrond van de behandeling wordt bevestigd door een afname van de virale last. Na herstel wordt het RNA van het pathogeen niet gedetecteerd, alleen immunoglobulinen G blijven achter, wat duidt op de overgedragen ziekte.

Indicaties voor EIA

In de meeste gevallen kan immuniteit de pathogeen niet zelfstandig aan, omdat het er geen krachtig antwoord op vormt. Dit is het gevolg van een verandering in de structuur van het virus, waardoor de geproduceerde antilichamen niet effectief zijn.

Gewoonlijk wordt ELISA verschillende keren toegediend, omdat dit kan resulteren in een negatief resultaat (eerste van de ziekte) of vals-positief (bij zwangere vrouwen, in auto-immuunpathologieën of in anti-HIV-therapie).

Om de ELISA-respons te bevestigen of te weerleggen, is het noodzakelijk om het binnen een maand opnieuw uit te voeren en ook bloed te doneren voor PCR en biochemie.

Antilichamen tegen het hepatitis C-virus worden onderzocht:

  1. injecterende drugsgebruikers;
  2. bij mensen met cirrose van de lever;
  3. als de zwangere vrouw een virusdrager is. In dit geval zijn zowel de moeder als de baby onderworpen aan het onderzoek. Het infectierisico varieert van 5% tot 25%, afhankelijk van de virale lading en de activiteit van de ziekte;
  4. na onbeschermde seks te hebben gehad. De kans op transmissie van het virus is niet groter dan 5%, maar in geval van trauma aan de slijmvliesgenitaliën, bij homoseksuelen, en ook bij liefhebbers van frequente partnerveranderingen, is het risico veel groter;
  5. na tatoeëren en piercen;
  6. na het bezoeken van een schoonheidssalon met een slechte reputatie, aangezien infectie kan optreden door besmet gereedschap;
  7. voor het doneren van bloed, als een persoon donor wenst te worden;
  8. bij de medische staf;
  9. voor internaatmedewerkers;
  10. de nieuw vrijgegeven van de MLS;
  11. als een toename van leverenzymen (ALT, AST) wordt gedetecteerd - om virale orgaanschade uit te sluiten;
  12. in nauw contact met de virusdrager;
  13. bij mensen met hepatosplenomegalie (verhoogd volume van de lever en milt);
  14. bij HIV-positieve mensen;
  15. bij een persoon met geelzucht van de huid, hyperpigmentatie van de handpalmen, chronische vermoeidheid en pijn in de lever;
  16. vóór de geplande chirurgische ingreep;
  17. bij het plannen van een zwangerschap;
  18. bij mensen met structurele veranderingen in de lever, geïdentificeerd met echografie.

Immunoenzyme-analyse wordt gebruikt als screening voor een massale enquête onder mensen en het zoeken naar virusdragers. Dit helpt om een ​​uitbraak van een infectieziekte te voorkomen. Behandeling gestart in de beginfase van hepatitis is veel effectiever dan therapie tegen cirrose.

Soorten antilichamen

Om de resultaten van laboratoriumdiagnostiek goed te kunnen interpreteren, moet u weten wat antilichamen zijn en wat ze kunnen betekenen:

  1. anti-HCV IgG is het hoofdtype van antigenen voorgesteld door immunoglobulinen G. Ze kunnen worden gedetecteerd tijdens een primair menselijk onderzoek, zodat men de ziekte kan vermoeden. Met een positief antwoord is het de moeite waard het langzame infectieuze proces of het contact van de immuniteit met virussen in het verleden te overwegen. De patiënt heeft verdere diagnose nodig met PCR;
  2. anti-HCVcoreIgM. Dit type marker betekent "antilichamen tegen nucleaire structuren" van een pathogeen agens. Ze verschijnen in de nabije toekomst na infectie en duiden op een acute ziekte. De toename in titer wordt opgemerkt met een afname van de sterkte van de immuunafweer en de activering van virussen in het chronische verloop van de ziekte. Bij remissie is de marker zwak positief;
  3. totaal anti-HCV - de totale index van antilichamen tegen de structurele eiwitverbindingen van het pathogeen. Vaak is het precies waarmee je het stadium van de pathologie nauwkeurig kunt diagnosticeren. Laboratoriumtesten worden informatief na 1-1,5 maanden vanaf het moment van HCV-penetratie in het lichaam. De totale antilichamen tegen het hepatitis C-virus zijn de immunoglobuline M- en G-test en hun groei wordt gemiddeld 8 weken na infectie waargenomen. Ze blijven levenslang bestaan ​​en duiden op een overgedragen ziekte of een chronisch beloop;
  4. anti-HCVNS. De indicator is een antilichaam tegen de niet-structurele exciter-eiwitten. Deze omvatten NS3, NS4 en NS5. Het eerste type wordt gevonden aan het begin van de ziekte en geeft het contact van de immuniteit met HCV aan. Het is een indicator van infectie. Langdurig behoud van het hoge niveau is een indirect teken van chronische infectie van het virus-ontstekingsproces in de lever. Antistoffen tegen de resterende twee soorten eiwitstructuren worden gedetecteerd in het late stadium van hepatitis. NS4 - een indicator van de mate van orgaanschade, en NS5 - geeft een chronisch verloop van de ziekte aan. Het verlagen van hun titers kan worden beschouwd als het begin van remissie. Gezien de hoge kosten van laboratoriumtests, wordt het in de praktijk zelden gebruikt.

Er is ook een andere marker - HCV-RNA, waarbij een genetische set pathogenen in het bloed wordt gezocht. Afhankelijk van de virale lading, kan de drager van de infectie meer of minder besmettelijk zijn. Voor de test worden zeer gevoelige testsystemen gebruikt, die het mogelijk maken om een ​​pathogeen agens in het preklinische stadium te detecteren. Bovendien kan PCR infectie detecteren in een stadium waarin antilichamen nog niet beschikbaar zijn.

Tijd van verschijnen van antilichamen in het bloed

Het is belangrijk om te begrijpen dat antilichamen op verschillende tijdstippen verschijnen, waardoor u de fase van het infectieuze-inflammatoire proces nauwkeuriger kunt vaststellen, het risico op complicaties kunt inschatten en ook hepatitis kunt vermoeden aan het begin van de ontwikkeling.

De totale immunoglobulines beginnen zich in de tweede maand van infectie in het bloed te registreren. In de eerste 6 weken neemt het IgM-niveau snel toe. Dit duidt op een acuut verloop van de ziekte en een hoge activiteit van het virus. Na het begin van een piek van hun concentratie, wordt een afname waargenomen, wat het begin van de volgende fase van de ziekte aangeeft.

Als antilichamen van klasse G worden gedetecteerd voor hepatitis C, is het de moeite waard om het einde van de acute fase en de overgang van de pathologie in een chronische fase te vermoeden. Ze worden gedetecteerd na drie maanden vanaf het moment van infectie in het lichaam.

Soms kunnen de totale antilichamen al in de tweede maand van de ziekte worden geïsoleerd.

Wat betreft anti-NS3 worden ze in een vroeg stadium van seroconversie en anti-NS4 en -NS5 in een later stadium gedetecteerd.

Uitleg van studies

Voor de detectie van immunoglobulinen wordt de ELISA-methode gebruikt. Het is gebaseerd op de antigeen-antilichaamreactie, die optreedt onder de werking van speciale enzymen.

Normaal gesproken wordt de totale score niet in het bloed geregistreerd. Om de antilichamen te kwantificeren, wordt de positieve factor "R" gebruikt. Het geeft de dichtheid van de testmarker in het biologische materiaal aan. De referentiewaarden zijn van nul tot 0,8. Een bereik van 0,8-1 geeft een twijfelachtige respons van de diagnose aan en vereist verder onderzoek van de patiënt. Een positief resultaat wordt overwogen wanneer de R-eenheid wordt overschreden.

Antigenen van hepatitis met

Vandaag kennen we een minimum van 10 structurele en niet-structurele eiwitten, die worden gecodeerd door het HCV-genoom. Structurele eiwitten omvatten kern, omhulsel 1 en omhulsel 2. Het kernproteïne is een nucleocapside-eiwit, terwijl omhulsel 1 en omhulsel 2 glycoproteïnen zijn van de buitenste envelop van het virus. Een eiwit p7 wordt ook gecodeerd in het structurele gebied, waarvan de functie niet duidelijk is, maar een analogie met andere vertegenwoordigers van de Flaviviridae-familie suggereert dat de functie ervan verband houdt met de afgifte van het virion uit de geïnfecteerde cel.
Dit eiwit wordt gespleten door het cellulaire peptidase van envelop 2, maar niet in alle gevallen, waardoor het bestaan ​​van envelop 2 in de vorm van twee vormen steeds minder uitgebreid wordt.

ongestructureerde genoomregio HCV codeert voor 6 eiwitten - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A en NS5B. Het NS2-eiwit is een van viraal metaal afhankelijk proteïnase. Het NS4A-eiwit werkt als een effector of cofactor voor de NSZ-proteolytische activiteit in NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B-slicingsites van het polyproteïne van het virus.

Op dit moment, fragmenten structurele en niet-structurele eiwitten verkregen door genetische manipulatie (recombinante eiwitten) of door chemische synthese, worden gebruikt als antigenen bij het ontwerp van enzymgekoppelde immunoassaysystemen. De eerste generatie immuno-enzymtestsystemen verscheen in 1989 op de markt en was gebaseerd op directe ELISA. Als het immunosorbens werden fragmenten van twee eiwitten, NS3 en NS4, aangeduid als 5-1-1 en C100-3, gebruikt.

Tegelijkertijd de bevestiging tests op basis van immunoblot met recombinante eiwitten (RIBA). De gevoeligheid van deze eerste generatie testsystemen was slechts 64% voor ELISA en 55% voor immunoblot. Testsystemen van de tweede generatie zijn in 1991 op de markt verschenen. Als een antigeen geadsorbeerd aan een vaste fase in deze testsystemen gebruikt capside eiwitten (fragment s22-3) en NS3-structurele regio antigenen (fragmenten van C200 en sZZs) en NS4, waardoor betere sensitiviteit en specificiteit studies. Omdat de humorale immuunrespons tegen antigenen (structurele eiwitten) naginaetsya sneller gem op niet-structurele proteïnen capside, werd de periode van infectie detecteerbare seroconversie teruggebracht tot twee maanden.

Bevestigende testsystemen op basis van immunoblot toegestaan ​​om de antigenen te identificeren die bij de reactie zijn betrokken. De resultaten verkregen met deze testsystemen werden alleen als positief geïnterpreteerd door de reactie van de antilichamen in het testsubstraat met ten minste twee antigenen, terwijl in aanwezigheid van een reactie met slechts één van de antigenen, het resultaat als onzeker werd beschouwd. Er werd gevonden dat de specificiteit van de tweede generatie testsystemen afhing van de bron van de antigenen. In 1993 verscheen de derde generatie testsystemen op de markt. Naast de bovengenoemde antigenen, gebruiken deze testsystemen ook antigenen waarvan de aminozuursequentie overeenkomt met de immunodominante regio's van NS5-eiwitten.

In de eerste, tweede en derde generatie testsystemen, als antigenen Recombinante of synthetische peptiden werden gebruikt. Op dit moment is het ook mogelijk om de testsystemen van de vierde generatie te identificeren waarin combinaties van recombinante en synthetische peptiden worden gebruikt als een immunosorbens.

Ervaring met toepassing testsystemen verschillende generaties in de wereld zijn erg groot. Het bleek dat als met behulp van testsystemen van de eerste of tweede generatie bij patiënten met acute virale hepatitis C, antilichamen werden gedetecteerd bij 10-16 en in sommige gevallen 25-30 weken na het begin van de ziekte, waarna diagnostica van de derde generatie deze periode konden verkorten tot 2-3 weken. Volgens gegeneraliseerde gegevens is de gevoeligheid van testsystemen voor de eerste, tweede en derde generatie respectievelijk 70-80%, 92-95% en 97%.

Op hetzelfde moment, volgens S. Colin, 2001, gevoeligheid testsystemen van de derde generatie was 98,9% bij patiënten met chronische leverziekte en 97,2% in speciale controlepanelen van sera. Het bereiken van de hoge gevoeligheid van de immunoassay-testsystemen van de 3e en 4e generatie brengt enkele problemen met zich mee om de specificiteit van de onderzoeken te waarborgen, wat in sommige gevallen tot fout-positieve resultaten kan leiden. In de literatuur zijn er gegevens over mogelijke fouten in de specificiteit van ELISA 3-testsystemen. Ze zijn gemeenschappelijk voor alle ELISA-testsystemen, inclusief testsystemen voor de diagnose van AIDS.

Valse positieve resultaten kunnen een gevolg zijn van toegenomen gehalte in de monsters van gamma-globulinen (serum Nederlandse ras patiënten, multiple myeloma, rheumatoïde factoren), leverziekten (cirrose, kanker), auto-immuunziekten (collageen-ziekte, auto-immuun hepatitis), andere virale infecties (HIV, hepatitis B) en langetermijnopslag sera veranderende temperatuuromstandigheden. Het uitvoeren van elke immunisatie kan ook gepaard gaan met een toename van de frequentie van valse positieven. De momenteel aanbevolen maatregelen om dit probleem op te lossen zijn als volgt: a) het opnieuw organiseren van het monster in dezelfde IFTS; b) herhaalde detectie van anti-HCV in een andere IFNT; c) gebruik van bevestigende tests op basis van ELISA en immunoblot.

Gebruik echter de voorgestelde verificatiemethoden de resultaten leiden vaak tot discrepanties in hun uiteindelijke interpretatie, zoals blijkt uit het onderzoek van Russische en buitenlandse onderzoekers.

Momenteel fabrikanten IFTS voor het detecteren van anti-HCV bereiken hoge gevoeligheid, of door vollediger detectie van antilichamen tegen NS3-antigenen of antilichamen tegen kern. Vergelijkende studies in verscheidene risicogroepen en speciale bedieningspanelen is gebleken dat het testsysteem, is het beter om antilichamen te identificeren voor de NS3 waren iets gevoeliger dan het testsysteem, is het beter om antilichamen te identificeren kern. Hun gevoeligheid was respectievelijk 99,9% en 98,6%.

De totale markers en transcript van de analyse voor antilichamen tegen hepatitis C

Virale schade aan de lever wordt tegenwoordig vaak gemanifesteerd in de praktijk van gastro-enterologen. En de leider zal natuurlijk een van deze hepatitis C zijn. Naar het chronische stadium gaan, veroorzaakt aanzienlijke schade aan de levercellen en verstoort de spijsverterings- en barrièrefuncties.

Hepatitis C wordt gekenmerkt door een langzame stroom, een lange periode zonder manifestatie van de belangrijkste symptomen van de ziekte en een hoog risico op complicaties. De ziekte lijdt niet lang en kan alleen worden ontdekt door de test op antilichamen tegen hepatitis C en andere markers.

De hepatocyten (levercellen) worden beïnvloed door het virus, het veroorzaakt hun disfunctie en vernietiging. Geleidelijk aan, na het doorlopen van het stadium van chronicisatie, leidt de ziekte tot de dood van een persoon. Tijdige diagnose van een patiënt voor hepatitis C-antilichamen kan de ontwikkeling van de ziekte stoppen, de kwaliteit en levensverwachting van de patiënt verbeteren.

Het hepatitis C-virus werd voor het eerst geïsoleerd aan het einde van de 20e eeuw. De geneeskunde onderscheidt vandaag zes variaties van het virus en meer dan honderd van zijn subtypen. De definitie van een variëteit van een microbe en zijn subtype in een persoon is erg belangrijk, omdat ze het verloop van de ziekte bepalen en daarom de behandelingsbenaderingen.

Sinds de eerste opname van het virus in het menselijk bloed, vóór het begin van de eerste symptomen, duurt het 2 tot 20 weken. Meer dan vier vijfde van alle gevallen van acute infectie ontwikkelt zich zonder enige symptomen. En slechts in een van de vijf gevallen is het mogelijk om een ​​acuut proces te ontwikkelen met een kenmerkend helder klinisch beeld volgens alle regels voor de overdracht van geelzucht. Het chronische verloop van de infectie krijgt meer dan de helft van de zieke en gaat vervolgens over op cirrose van de lever.

Geïdentificeerd in de tijd kunnen antilichamen tegen het hepatitis C-virus de infectie in het meest primaire stadium diagnosticeren en de patiënt een kans geven op een volledige genezing.

Wat zijn antilichamen tegen hepatitis C?

Mensen die geen familie van medicijnen zijn, kunnen een natuurlijke vraag stellen: antilichamen tegen hepatitis C, wat is het?

Het virus van deze ziekte in zijn structuur bevat een aantal eiwitcomponenten. Wanneer ze worden ingenomen, zorgen deze eiwitten ervoor dat het immuunsysteem reageert en dat antilichamen tegen hepatitis C worden gevormd. Verschillende soorten antilichamen worden geïsoleerd, afhankelijk van het type van het originele eiwit. Ze zijn op verschillende tijdstippen bepaald laboratorium en diagnosticeren de verschillende stadia van de ziekte.

Hoe wordt de hepatitis C-antilichaamtest uitgevoerd?

Om antilichamen tegen hepatitis C te detecteren produceert een man in het laboratorium een ​​omheining van veneus bloed. Deze studie is handig omdat het geen voorafgaande voorbereiding vereist, behalve onthouding van eten 8 uur vóór de procedure. In een steriele buis wordt het bloed van de patiënt bewaard, na immuno-enzym-analyse (ELISA) op basis van antigeen-antilichaambinding worden geschikte immunoglobulinen gedetecteerd.

Indicatie voor de diagnose:

  • stoornissen in het werk van de lever, klachten van de patiënt;
  • verhoogde indicatoren van leverfunctie in biochemische analyse - transaminasen en bilirubine fracties;
  • pre-operatief onderzoek;
  • zwangerschapsplanning;
  • twijfelachtige gegevens van echografische diagnose van de buikholte, in het bijzonder de lever.

Maar vaak worden hepatitis C-antilichamen in het bloed vrij per ongeluk aangetroffen bij het onderzoeken van een zwangere of geplande operatie. Voor een persoon is deze informatie in veel gevallen een schok. Maar geen paniek.

Er zijn een aantal gevallen waarin zowel vals-negatieve als fout-positieve resultaten van de diagnose mogelijk zijn. Daarom is het aanbevolen om na overleg met een specialist een twijfelachtige analyse te herhalen.

Als antilichamen tegen hepatitis C worden gedetecteerd, is het niet de moeite waard om zich aan te passen aan het ergste. U dient advies in te winnen van een gespecialiseerde specialist en aanvullende onderzoeken uit te voeren.

Soorten antilichamen tegen hepatitis C

Afhankelijk van het antigeen waaraan ze zijn gevormd, worden antilichamen voor hepatitis C in groepen verdeeld.

Anti-HCV IgG - Klasse G-antilichamen tegen hepatitis C-virus

Dit is het belangrijkste type antilichamen dat wordt bepaald voor de diagnose van een infectie tijdens de initiële screening bij patiënten. "Deze hepatitis C-markers, wat is het?" - elke patiënt zal de dokter vragen.

Als deze antilichamen tegen hepatitis C positief zijn, geeft dit aan dat het immuunsysteem al eerder aan dit virus is blootgesteld, kan er sprake zijn van een vorm met langzame start van de ziekte zonder een levendig ziektebeeld. Op het moment van bemonstering is er geen actieve replicatie van het virus.

De detectie van immunoglobuline-gegevens in iemands bloed is de reden voor een aanvullend onderzoek (detectie van RNA van de veroorzaker van hepatitis C).

Anti-HCV-kern-IgM - antilichamen van klasse M voor nucleaire eiwitten HCV

Dit type markers begint op te vallen onmiddellijk nadat het pathogene micro-organisme het menselijk lichaam raakt. Laboratorium kan worden gevolgd een maand na het geval van infectie. Als antilichamen tegen hepatitis C van klasse M worden gedetecteerd, wordt een acute fase gediagnosticeerd. Het aantal van deze antilichamen neemt toe op het moment van verzwakking van de immuniteit en activering van het virus in het chronische proces van de ziekte.

Met een afname van de activiteit van het pathogeen en de overgang van de ziekte naar een chronische vorm, kan dit type antilichamen niet meer worden gediagnosticeerd in het bloed tijdens onderzoek.

Totaal anti-HCV - totaalantistoffen tegen hepatitis C (IgG en IgM)

In praktische situaties worden ze vaker naar dit type onderzoek verwezen. Antilichamen tegen hepatitis C-virus totaal vertegenwoordigt de detectie van beide markeerders klassen M en G. Dit wordt informatieve analyse na opslag van de eerste klasse van antilichamen, d.w.z. 3-6 weken na infectie feit. Twee maanden later, gemiddeld na deze datum, worden immunoglobulinen van de G-klasse actief geproduceerd. Ze worden voor altijd in het bloed van een zieke persoon vastgelegd of totdat het virus is geëlimineerd.

De totale antilichamen tegen hepatitis C zijn een universele manier voor primaire screening van de ziekte een maand na menselijke infectie.

Anti-HCV NS - antilichamen tegen niet-structurele eiwitten HCV

De hierboven genoemde markers behoorden tot structurele eiwitverbindingen van de veroorzaker van hepatitis C. Maar er is een klasse van eiwitten die niet-structurele eiwitten worden genoemd. Ze kunnen ook worden gebruikt om de ziekte van de patiënt te diagnosticeren. Dit zijn NS3, NS4, NS5-groepen.

Antistoffen tegen NS3-elementen worden gedetecteerd in de allereerste fase. Kenmerk de primaire interactie met de ziekteverwekker en dien als onafhankelijke indicator van de aanwezigheid van een infectie. Langdurige retentie van deze titers in grote hoeveelheden kan een indicator zijn van het verhoogde risico van infectie-overgang naar een chronische vorm.

Antilichamen tegen NS4- en NS5-elementen worden gedetecteerd in de late perioden van de ziekte. De eerste geeft het niveau van leverschade aan, de tweede - over de lancering van chronische infectiemechanismen. Het verlagen van de titers van beide indicatoren zal een positief teken zijn van het begin van remissie.

In de praktijk wordt de aanwezigheid van ongestructureerde hepatitis C-antilichamen in het bloed zelden gecontroleerd, omdat dit de kosten van de studie aanzienlijk verhoogt. Vaker voor het bestuderen van de leveraandoening worden antistoffen tegen hepatitis C gebruikt.

Andere markers van hepatitis C

In de medische praktijk zijn er verschillende andere indicatoren die de aanwezigheid van een patiënt met het hepatitis C-virus beoordelen.

HCV-RNA - Hepatitis C-virus-RNA

Het veroorzakende agens van hepatitis C is het RNA-bevattende, daarom is het mogelijk om een ​​omgekeerde transcriptie PCR-werkwijze uit te voeren om het gen van het pathogeen in het bloed of biomateriaal, genomen met leverbiopsie, te detecteren.

Deze testsystemen zijn zeer gevoelig en kunnen zelfs één enkel deeltje van het virus in het materiaal detecteren.

Op deze manier is het niet alleen mogelijk om de ziekte te diagnosticeren, maar ook om het type ervan te bepalen, wat helpt bij het ontwikkelen van een plan voor toekomstige behandeling.

Antilichamen tegen hepatitis C: interpretatie van de analyse

Als de patiënt de resultaten van de analyse heeft ontvangen voor de detectie van hepatitis C met een enzymimmunoassay (ELISA), kan hij zich afvragen: - hepatitis C-antilichamen, wat is het? En wat laten ze zien?

Bij het bestuderen van het biomateriaal voor hepatitis C, worden de totale antilichamen niet gedetecteerd.

Laten we eens kijken naar voorbeelden van IFA-analyses voor hepatitis C en hun interpretatie:

"Hepatitis C virus: virale antigenen en de reactie daarop, het immuunsysteem van de gastheer gegevens handboek Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578891] -078,33 Hepatitis C virus :. "

VIRUS HEPATITIS C:

antigenen van het virus en de reactie

op hen het immuunsysteem

Hepatitis C-virus: antigenen van het virus en de reactie daarop van het immuunsysteem van het macrorganisme:

informatiemethodisch handboek / L.I. Nikolaev.

- Novosibirsk: Vector-Best, 2009. 78 p.

De handleiding beschrijft de huidige kennis van de moleculaire biologie van het hepatitis C virus (HCV) antigeen en de afweer van de gastheer wanneer geïnfecteerd met dit virus. Onderzoek van de verschillen in de specifieke humorale immuniteit bij mensen met acute en chronische hepatitis C, patronen van verandering in de inhoud van de antivirus antilichamen met de huidige gang van acute en chronische infecties, alsmede de specifieke kenmerken van humorale immuniteit bij kinderen met markers van HCV-infectie.

De handleiding is bedoeld voor medewerkers van biologische en medische onderzoeksinstituten, voor werknemers van medische diagnostische centra en studenten van faculteiten voor postdoctorale opleiding van artsen.

LI Nikolaeva - Doctor of Biological Sciences, Leading Researcher van het VI Lenin Research Institute of Virology. DI Ivanovskiy Russische Academie voor Medische Wetenschappen.

Het wordt gepubliceerd in de auteurseditie.

© Nikolaeva LI, 2009 © ZAO Vector-Best, 2009

LIJST VAN ACRONIEMEN

ako - aminozuur (-e) rest (-tki) ALT - alanine-aminotransferase APC - antigeenpresenterende cellen AST - aspartaat aminotransferase HCV - hepatitis C virus TOS - hepatitis C HIV - human immunodeficiency virus HPV - virusachtige partikels HWR - hypervariabele regio IL - interleukine IFN - interferon kD - kilodalton LDL - low density lipoproteïnen VLDL - zeer lage dichtheid lipoproteïnen mAb - monoklonaal antilichaam MHC - major histocompatibility complex (major histocompatibility complex) NTR - getranslateerd gebied AHC - ost Eerst hepatitis C RT-PCR - omgekeerde transcriptie polymerase kettingreactie HPV - psevdovirusnye deeltjes PCR - polymerase chain reaction CHC - chronische hepatitis C TCL - T-helper lymfocyten CTL - cytotoxische T-lymfocyten EPR - endoplasmatisch retirulum

INHOUDSTAFEL

Hoofdstuk 1. Hepatitis C-virus

1.1. Organisatie van het virusgenoom

1.2. De structuur van het virion

Hoofdstuk 2. De belangrijkste antigenen van het hepatitis-virus.

2.1. Structuur, functies en epitopen van omhulde glycoproteïnen

2.2. Nucleocapsid-antigeen

2.3. Kenmerken van het eiwit NS2

2.4. Structuur, functies en epitopen van het NS3-eiwit.

2.5. NS4a- en NS4b-polypeptiden en hun determinanten. 35

2.6. Biologische significantie en epitopen van eiwitten NS5a en NS5b

Hoofdstuk 3. De rol van het immuunsysteem bij het beperken van HCV-infectie

3.1. De belangrijkste factoren van het immuunsysteem die invloed hebben op de eliminatie van het virus in de acute fase van infectie. _

3.2. De rol van de T-celrespons bij hepatitis C

3.3. Humorale reactie op antigenen van het hepatitis C-virus 49 3.3.1. Specifieke antilichamen in de acute fase van infectie. _ 3.3.2. Specifieke humorale immuniteit in het natuurlijke verloop van chronische hepatitis C. 55 3.3.3. HCV-specifieke humorale immuniteit bij mensen die een acute infectie met herstel hebben ondergaan

3.3.4. Specifieke humorale immuniteit bij kinderen met markers van HCV-infectie

INTRODUCTIE

Momenteel is er, net als in de meeste landen, in de Russische Federatie een ongunstige epidemiologische situatie in parenterale virale hepatitis [1-3]. Verwacht wordt dat dit in 2015-2020 het geval zal zijn. het aantal geïnfecteerde mensen over de hele wereld zal verdubbelen [2, 3]. Sinds 2001 daalt de incidentie van acute hepatitis C (OCS) in ons land [1, 4]. Na 2004 begon de incidentie van detectie van mensen met chronische hepatitis C (CHC) te verminderen [5, 6].

Echter, bij kinderen tot 2006 een groei in het aantal patiënten met chronische hepatitis C [1, 5, 6]. Experts schatten dat 1,4-2,4% van de Russische burgers zijn besmet met het hepatitis C virus (HCV), en de meeste van deze mensen hebben een chronische infectie [7, 8]. CHC typische progressief verloop leidt tot de vorming van levercirrose (30%), primair hepatocellulair carcinoom (15%) en extrahepatische manifestaties (tot 74%) [9, 10].

Ondanks de intensieve studie van HCV-infectie, is het nog steeds niet in staat om de oorzaak van de voorkomende vormen van chronische infectie te bepalen, om bepaalde immuunrespons te identificeren, waardoor de natuurlijke eliminatie van het virus in de acute fase van de infectie, evenals een preventief vaccin te maken. Het is bekend dat HCV-antigenen een B- en T-celrespons kunnen induceren, wat bij 15-25% van de mensen met acute hepatitis C voldoende is om het virus te elimineren [2, 11]. Maar meestal gaat de acute fase van infectie over in een chronische vorm tegen een achtergrond van een meer of minder uitgesproken adaptieve immuunrespons [12, 13].

Hepatitis C-virus - unieke pathogeen dat in staat is immuun controle onttrekken, waardoor nieuwe genetische en antigene variatie, het uitstellen van de vorming van T-helper en T-killer cel respons bij acute hepatitis C-infectie en veroorzaken opnieuw gewonnen bij de mens. Intensieve studie van HCV-infectie begon na de identificatie van de veroorzaker in 1989 en in de eerste plaats nagestreefd het belangrijkste doel - de oprichting van een preventief vaccin [14, 15]. Eind 1990, na mislukte pogingen om een ​​vaccin gebaseerd op recombinant HCV-manteleiwitten van de focus van de studie antivirale immuniteit ontwikkelen gevestigd op een specifieke T-celreactie.

Opgemerkt moet worden dat de studie van beschermende immuunmechanismen bij hepatitis C grotendeels wordt beperkt door het ontbreken van een toegankelijk laboratoriummodel voor infectie, het virus treft alleen mensen en chimpansees. Maar zoals A. Basset en co-auteurs hebben aangetoond, is het verloop van de infectie in chimpansees die zijn geïnfecteerd met een virus, lichter van vorm en vindt herstel vaker plaats dan bij mensen [16].

Deze handleiding vat de huidige gegevens over HCV-antigenen samen en onderzoekt de mogelijkheden van immuunbescherming van het menselijk lichaam bij deze infectie. Bijzondere aandacht wordt besteed aan een specifieke humorale respons, omdat deze buiten het veld van intensieve studie viel. Zoals opgemerkt door buitenlandse onderzoekers, is dit voornamelijk het gevolg van het gebrek aan beschikbare methoden voor het analyseren van antilichamen tegen afzonderlijke (individuele) antigenen van HCV [17]. Sinds 1998 zijn immunoenzymtestsystemen voor de analyse van immunoglobulines voor individuele HCV-antigenen in ons land geproduceerd, waardoor binnenlandse specialisten waardevolle informatie over de kenmerken van de humorale respons op virale eiwitten konden verkrijgen.

6 Hoofdstuk 1. Hepatitis C-virus

1.1. Organisatie van het virusgenoom In 1989-1990 werd het dankzij de ontwikkeling van moleculair genetische methoden mogelijk het HCV-genoom te klonen en te isoleren, en vervolgens het virus zelf, waarvan het bestaan ​​eerder was voorspeld [14, 15, 18, 19]. Kenmerken van de organisatie van het HCV-genoom lieten toe dat het werd opgenomen in de Flaviviridae-familie in het nieuwe genus Hepacivirus, dat later lid werd van andere virussen [15, 20, 21]. Het HCV-genoom is een enkelstrengs RNA met een positieve polariteit en bevat ongeveer 9400-9600 nucleotide-residuen. Het wordt gekenmerkt door: een uniek open leeskader, korte 5- en 3-uiteinde niet-vertaalde gebieden (NTO's) en gebieden met een hoge frequentie van mutaties [21, 22].

Het open leesraam codeert voor een enkele eiwitvoorloper, het polyproteïne genaamd, dat bestaat uit 3008-3037 aminozuurresiduen (ako) [23]. Als een gevolg van de co- en post-translationele proteolytische splitsing van het polyproteïne en de verwerking van producten, worden structurele en niet-structurele eiwitten gevormd. De lay-out van de virale antigenen in het polyeiwit, de plaats van werking van proteasen en de graad van homologie tussen de verschillende isolaten van het virus wordt getoond in Fig. 1 [24].

Vanwege de genetische diversiteit van HCV in de vroege jaren 1990, was het moeilijk om zijn isolaten te classificeren. In 1994, tijdens de II International Conference over hepatitis C-virus en verwante virussen, werd besloten de virusclassificatie te baseren op het genoomgebied dat codeert voor het NS5b-eiwit [25]. Als een resultaat werden 6 genotypen en ongeveer 80 subtypen HCV geïsoleerd.

(5-NTO) * (3-STO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Afb. 1. Schema van de locatie van virale antigenen in het polyeiwit [24]. De actielocaties van cellulaire proteasen zijn gemarkeerd door pijlen vanaf de bovenkant, voor serineprotease van HCV - van onderen. De site gesplitst door de NS2 / NS3-virale protease wordt geïdentificeerd door een asterisk.

Hieronder is het percentage homologie tussen virusisolaten met betrekking tot HTO.

De belangrijkste genotypen zijn homoloog met 65-70%, subtypes (subtypen) - met 77-80% en genetische varianten binnen één isolaat - met 95-97%. Later, in 2005, verduidelijkte een groep van deskundigen de classificatie van de HCV [26]. Het wordt aanbevolen om de term 'genotype' te behouden in plaats van de 'clayd' die door sommige onderzoekers wordt gesuggereerd. Bij het typen van virusisolaten moet de kern / El, NS5b genoomregio worden geanalyseerd en de nucleotidesequentie van het gehele virus-RNA worden bepaald als er een vermoeden van recombinatie bestaat [27]. Alle bekende HCV-isolaten worden nu in zes genotypen geclassificeerd en de genotypes 7-10 die door sommige onderzoekers zijn geïntroduceerd, worden als subtypes beschouwd.

Het meest geconserveerde deel van HCV-RNA is de 5-terminale HTO-ongeveer 92% homologie [22]. Door deze conservatieve site was het mogelijk om door middel van RT-PCR viraal RNA in verschillende isolaten te detecteren (reverse transcriptie van de polymerasekettingreactie) [28, 29]. In een geïnfecteerd organisme bestaat HCV als een verzameling genetisch ongelijke maar nauw verwante varianten, quasispecies genaamd, waarvan de verschillen in de nucleotidensequentie enkele procenten zijn [30].

Tijdens het infectieuze proces ondergaat het virus een immuunpers: sommige varianten van HCV worden verwijderd door het immuunsysteem van de gastheer, terwijl andere zich voordoen [31, 32]. Nieuwe varianten van het virus verschijnen als gevolg van de afwezigheid van RNA-afhankelijk RNA-polymerase van HCV, corrigerende 3-5-exonuclease-activiteit [33]. Daarom worden fouten die optreden tijdens de replicatie van viraal RNA niet geëlimineerd.

De meeste veranderingen in de nucleotidesequentie van HCV-RNA worden gevonden in zogenaamde synonieme sites, mutaties waarin de biologisch belangrijke eigenschappen van het virus niet worden beïnvloed. Vergelijking van synonieme sites stelt u in staat om de divergentie vast te stellen van de virusvarianten die worden vergeleken. Dus, bij het bestuderen van isolaten van HCV geïsoleerd in verschillende territoria, bleek dat de penetratie van het virus in de menselijke populatie waarschijnlijk ongeveer duizend jaar geleden plaatsvond [34, 35].

Het eerste element van het HCV-genoom, de 5-terminale HTO, bestaat uit 341 nucleotide-residuen en vervult belangrijke biologische functies. Deze regio verschaft de interactie van het virale RNA met de 40S-subeenheid van het ribosoom, waardoor een structureel complexe bindingsplaats wordt gevormd, de interne afkorting IRES (interne ribosoom-invoeringsplaats) genoemd [36]. IRES HCV heeft een complexe ruimtelijke structuur (Figuur 2) [37, 38].

- 480 60- 140-440-5500

Fig. 2. Het schema van de secundaire structuur van IRES met vier hoofddomeinen (I-IV), pseudo-knooppunt, hoofd (1) en extra (2) codons wordt gegeven met kleine veranderingen ten opzichte van het artikel D.M. Forton en co-auteurs [38].

Na de binding van de IRES van de HCV aan de 40S-subeenheid van het ribosoom begint de vorming van een actief translatiecomplex en begint de transmissie van het virale genoom met een doponafhankelijk mechanisme [37, 39]. Om de translatie te initiëren, wordt het AUG-codon gebruikt op positie 342 (figuur 2). Er is vastgesteld dat tijdens de interactie van het RNA van het virus en de 40S-subeenheid van het ribosoom in de laatste, complexe conformationele veranderingen optreden, wat een uniek proces is [40].

Voor de vertaling van het HCV-genoom zijn de gebruikelijke (canonieke) cellulaire initiatiefactoren eIF2 en eIF3 nodig. Aangezien het actieve complex langzaam gevormd translationele de initiële translatiesnelheid is laag, maar het verhoogt de interactie van positieve streng RNA noncanonical cel activator eiwitten, zoals antigen La heterogene nucleaire ribonucleoproteïne L en ribosomaal eiwit rpS5 verschillende geïdentificeerde cellulaire eiwitten [41-44 ].

Het vermogen van de IRES van HCV om te binden aan het ribosoom kan bepaalde cellulaire eiwitten, peptiden en vitamine B12 remmen [45-49].

De korte RNA's, kortweg interfererende RNA's genoemd, die complementair zijn aan de IRES-sites, binden eraan, stoppen de overdracht van het genoom van het virus [50]. Er wordt aangetoond dat het antivirale effect van alfa-, bèta- en gamma-interferonen zich ook manifesteert op het niveau van de door IRES gemedieerde translatie [51]. Er werd gevonden dat HCV weefselspecifieke verschillen in de structuur van IRES heeft [38, 52, 53]. Het is mogelijk dat dit een van de manieren is om de persistentie van het virus in de cellen van veel weefsels te waarborgen.

In de replicatie van het HCV-genoom wordt RNA gevormd met negatieve polariteit, de negatieve RNA-streng genoemd. Het is onstabiel, gespleten door cellulaire enzymen (in 30 minuten bijna 60%) [54]. In de geïnfecteerde cel is de verhouding van de plus- en min-ketens van RNA 10: 1 [55]. Voor effectieve replicatie van het virale genoom is het cellulaire eiwit PTB (polypyrimidine-tract bindend eiwit), dat de polypyrimidine-RNA-route [56] bindt, vereist. In model-experimenten werd vastgesteld dat per geïnfecteerde cel per dag ongeveer 1000 kopieën RNA-plus-ketens en ongeveer 100 kopieën RNA min-ketens worden gevormd [57].

Het laatste element van het genoom - de 3-terminale HTO - participeert in de start van replicatie (de initiatieplaats bevindt zich in de RNA-minus), in de regulatie van translatie en stabilisatie van genomisch RNA [41, 59-61]. In de structuur van de 3-terminal NTO worden drie elementen onderscheiden:

1) een kort gedeelte van een variabele die bestaat uit 40 nucleotide residuen, 2) poliuridinovy ​​kanaal met 36 of meer residuen uridine, en 3) een unieke geconserveerde gebied X, bestaande uit 98 nucleotiden [60]. Regio X heeft een complexe secundaire structuur, waarin één lange en twee korte haarspelden zijn geïsoleerd [61]. Gevonden werd dat dit gebied is direct betrokken bij de vorming van replicatieve complexe regulatie van translatie en replicatie [41, 62, 63].

1.2. De structuur van het virion Begin experimenten met HCV filtratie door filters met verschillende poriediameter is aangetoond dat een virion grootte van 30-60 nm, die samenvalt met de gegevens van elektronenmicroscopie-analyse van het virus in biologische monsters [64, 65]. In de vroege jaren 1990 uit het serum van mensen met hepatitis C zijn geïsoleerd RNA-bevattende deeltjes die bij ultracentrifugatie geconcentreerd in vijf gebieden in het traject van dichtheid van 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Elk van deze zones werd gebruikt om chimpansees te infecteren [68]. En het bleek dat de zone met een dichtheid van 0,95-1,10 g / ml de hoogste infectiviteit had. Deze uitzonderlijk lage dichtheid virusdeeltjes wordt toegelicht HCV associatie met serum lipoproteïnen met lage dichtheid (LDL) en zeer lage dichtheid (VLDL) [19, 66].

Lipoproteïnen zijn bolvormige deeltjes gevormd door een monolaag van fosfolipiden met insluitsels van cholesterol en apolipoproteïnen B en E, de inwendige holte van de deeltjes is gevuld met triglyceriden [69]. De belangrijkste functie van lipoproteïnen is levering van triglyceriden en cholesterol aan verschillende cellen. Lipoproteïnesynthese komt voor in het endoplasmatisch retitulum (EPR) van hepatocyten, waar ze vermoedelijk een interactie aangaan met de proteïneolipidenenveloppe van HCV, waardoor een complex wordt gevormd [70]. De secties van de HCV-envelop verantwoordelijk voor de vorming van een complex van het virus met LDL / VLDL zijn nog niet vastgesteld. Dit complex wordt lipovirusdeeltjes genoemd. Virionen in het complex worden beschermd tegen virus-neutraliserende antilichamen en kunnen doordringen in hepatocyten met behulp van een receptor voor LDL [68]. Ongeveer 75% van de lipoproteïnen die in het bloed circuleren, keren terug naar de hepatocyten via een speciale receptor voor LDL; de rest valt anders in hepatocyten. Er werd gevonden dat ongeveer 20% van de virionen niet geassocieerd zijn met serumlipoproteïnen [71].

Onderzoek naar de resistentie van HCV tegen organische oplosmiddelen, A.M. Prins en collega's hebben aangetoond dat het virus een lipide-proteïne reservoir dat is gevormd van een lipide gastheercel en virale oppervlakte-eiwitten [72]. In de daaropvolgende jaren werd HCV structuur gezocht op hoge resolutie elektronenmicroscopische analyse van lever biopten van patiënten met hepatitis C en synthetische virusachtige deeltjes (HPV). HPV worden gevormd na de expressie van een fragment van het HCV-genoom (een replicon genoemd) in verschillende vectoren. Virussen van vesiculaire stomatitis, vaccinia en baculovirus werden gebruikt als vectoren [73-75]. Wanneer geïncorporeerd in het genoom van een retrovirus (HIV of leukemievirus van muizen) een nucleotidesequentie die codeert voor de manteleiwitten van HCV, kunnen psevdovirusnye deeltjes te ontvangen (HPV) in een reservoir dat de E1- en E2-eiwitten van HCV en alle andere elementen van de aanwezige deeltjes zijn retrovirale [76, 77 ]. Het gebruik van HPV vergemakkelijkte de studie van de morfologie en assemblage van HCV, evenals de studie van de eigenschappen van zijn eiwitten. In het bijzonder werden de aangegeven afmetingen virion diameter van 50 nm, hetgeen overeenkomt met actuele gegevens verkregen bij het onderzoek van natieve virus geïsoleerd uit patiënten met hepatitis C [78, 79].

In Fig. 3 is een elektronenmicrofoto van HPV verkregen door een transmissie-elektronenmicroscoop [79].

Fig. 3. Elektronenmicrofotografie met negatief contrast van HPV [79].

Onderaan links, met een sterkere toename, wordt een enkelvoudig virion met T-vormige oppervlakte-eiwitten getoond.

Onder de envelop van HCV bevindt zich nucleocapside, dat wordt gevormd door een kerneiwit en dat viraal RNA bevat (Figuur 4). De dimensies van nucleocapside, zoals bepaald door elektronenmicroscopische analyse van virale deeltjes met een ongevormde schaal, zijn 33-40 nm [74].

Tot nu toe was het niet mogelijk HCV te isoleren in een hoeveelheid die voldoende was voor zijn gedetailleerde studie, hetzij van zieke mensen of van chimpansees. Dit komt door het lage gehalte van het virus, de heterogeniteit ervan en het vermogen om complexen te vormen met antilichamen en bloedlipoproteïnen. Het eerste rapport over de kweek van HCV op transplanteerbare celculturen werd gemaakt door P.G. Deryabin en co-auteurs in 1997 [81]. In 2005 publiceerden vier groepen onderzoekers experimentele gegevens over de expressie van het virus in transplanteerbare celculturen met de productie van infectieuze virale deeltjes [82-85].

De morfogenese van HCV komt voor in de membranen van het endoplasmatisch retitulum, de vacuolen van het Golgi-apparaat en het cytoplasma van de cel. Structurele eiwitten van het virus worden gesplitst van het polyproteïne door middel van cellulaire enzymen (signaalpeptidasen en peptideptidasen). Het kernproteïne blijft op het cytoplasmatische oppervlak van de EPR en in de lipidevacuolen van het cytoplasma en de envelopeiwitten dringen gedeeltelijk door in de binnenste holte van de EPR.

In het endoplasmatisch reticulum vormen de E1- en E2-eiwitten een complex en ondergaan ze een bewerking, die waarschijnlijk eindigt in de secretoire vacuolen van het Golgi-apparaat. Nucleocapside na het verpakken van RNA wordt gecoat en het virus wordt gebrouwen in EPR-reservoirs. Gebaseerd op de resultaten van leverbiopsieanalyse van patiënten met CHC V. Falcon en co-auteurs suggereerden dat de laatste stadia van de morfogenese van het virus voorkomen in EPR-achtige vesiculaire cytoplasmatische structuren [86]. Gevormde virale deeltjes verlaten de cel in de secretoire vacuolen [87].

De snelheid van virionvorming bij patiënten met chronische HCV-infectie kan 1012 deeltjes per dag bereiken en de halfwaardetijd van virionen in het bloed is ongeveer 3 uur [88].

Hoofdstuk 2. hepatitis C-virus antigeen drijfvermogen manteleiwitten HCV E1 en E2-eiwitten, nucleocapside en niet-structurele proteïnen NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b.

Bovendien worden ook kleine polypeptiden uit het virale genoom overgebracht: peptide p7, proteïne F en een weinig bestudeerd polypeptide met een molecuulgewicht van ongeveer 8 kDa [89].

De laatste twee minder belangrijke eiwitten worden gesynthetiseerd als resultaat van het lezen van de genetische informatie van additionele initiërende codons gelokaliseerd in het gebied van het genoom dat codeert voor het kerneiwit [22]. Er is vastgesteld dat een beetje bestudeerd polypeptide met een molecuulmassa van ongeveer 8 kDa wordt gelezen van codon 2 (zie Fig. 2). De rangschikking van HCV-eiwitten in het EPR-membraan is getoond in Fig. 5.

Peptide p7, ook wel viroporine HCV genoemd, vormt heptameren die een kationspecifiek kanaal vormen, waarvan de significantie in de biologie van het virus nog niet volledig is opgehelderd [91]. Er wordt aangenomen dat hij deelneemt aan de vroege stadia van de morfogenese van het virus. Onlangs is het effect van peptide p7 op de infectieuze eigenschappen van HCV aangetoond [92].

Eiwit F wordt gesynthetiseerd door het leesraam van de genetische code te verschuiven naar één nucleotide-residu (het nieuwe startcodon begint bij het 341st nucleotide residu, zie figuur 2) en heeft

EPR-holte Afb. 5. De rangschikking van HCV-eiwitten in het EPR-membraan wordt gegeven met kleine veranderingen van artikel B. Lindenbach en C.M. Rijst [90].

conservatieve aminozuursequentie [93, 94]. Een hypothese over de deelname van dit eiwit aan de ontwikkeling van persistente HCV-infectie werd voorgesteld [94, 95]. Misschien is er een verband tussen F-eiwit en het verschijnen van leversteatose bij chronische hepatitis C is aangetoond dat antilichamen tegen dit eiwit alleen gevonden in 10% van de patiënten met chronische hepatitis C, maar als de ontwikkeling van hepatische steatose detectie van deze antilichamen verdrievoudigd [96]. Momenteel is een intensieve studie van de biologische functies van de secundaire eiwitten van HCV gaande.

2.1. Structuur, functie en envelopglycoproteïne epitopen Bekleding E1 eiwitten (ako 192-383) en E2 (ako 384-746) zijn fragmenten van het polyeiwit zijn ingericht voor het medullaire (kern) eiwit (zie. Fig. 1) [97, 98]. Volgens de elektroforetische analyse is het molecuulgewicht van het El-eiwit 31 kDa, E2 is 70 kDa. Beide eiwitten behoren tot transmembrane eiwitten en bevatten koolhydraatresiduen [97]. De belangrijkste functies van deze eiwitten

- interactie met receptoren en zorgen voor de penetratie van het virale genoom in het cytoplasma van de cel.

Biosynthese van HCV-eiwitten wordt uitgevoerd op ribosomen geassocieerd met EPR. Vanwege een speciaal translocatiesignaal komt het grootste deel van het polyproteïnesegment dat overeenkomt met E1- en E2-eiwitten in de holte van EPR-reservoirs. Daar splitsen cellulaire signaalpeptidasen deze eiwitten van elkaar, evenals van het kerneiwit [62, 97-99]. (Peptidasen werkingsplaatsen getoond in fig. 1) daarna HCV manteleiwitten gebonden blijven aan de membranen vanwege de EPR transmembraan delen gelokaliseerd in de COOH-terminale gebieden van de polypeptideketens [99, 100].

Het complexe proces van ruimtelijke stapeling, of vouwen, van eiwitten E1 en E2 begint tegelijkertijd met translatie en eindigt erna. De hoofdstadia van E1 eiwitvouwing worden gedurende 1 uur uitgevoerd met behulp van het cellulaire eiwit-chaperonne calnexine, dat daarmee een kortdurend complex vormt [101, 102]. Met de deelname van calnexine uit acht cysteïne-residuen van glycoproteïne El, worden vier disulfide (S-S) -bindingen gevormd. Gedurende nog een uur wordt de ruimtelijke structuur van het glycoproteïne El gestabiliseerd [103].

Het vouwen van eiwit E2 is langer (ongeveer 4 uur) dan voor eiwit E1.

Het is duidelijk dat dit te wijten is aan de aanwezigheid van cysteïne-residuen in het 18-20-molecuul, dat 9-10 disulfidebindingen kan vormen en de intense glycosylatie van het E2-eiwit [104]. Ruimtelijke verpakking van het E2-eiwit vindt plaats met de deelname van calnexine en de niet-geïdentificeerde chaperones, evenals het El-eiwit [103, 104].

Er wordt aangenomen dat wanneer het voltooid is, 8-9 disulfidebindingen binnen één polypeptide en één S-binding tussen de twee E2-E2-polypeptiden in het E2-eiwit worden gevormd.

Het complex van E1-E2-schaaleiwitten wordt gevormd zonder het verschijnen van covalente bindingen [103-105]. De stoichiometrie van dit complex is nog niet vastgesteld, waarschijnlijk is de overheersende component het E2-eiwit [104]. De eiwitpakking en de vorming van een complex van glycoproteïnen komen niet altijd correct voor, de geassembleerde eiwitten E1 en E2, evenals hun complexen, worden gedetecteerd in EPR-reservoirs in de vorm van hoog-moleculaire aggregaten [105].

Onder de werking van cellulaire enzymen van het EPR-netwerk zijn de eiwitten E1 en E2 geglycosyleerd, waardoor de zogenaamde chitobiose-cortex wordt gevormd [97].

Het proces van glycosylatie begint gelijktijdig met het vouwen van eiwitten en eindigt in de vacuolen van het Golgi-apparaat. Glycosylatie verschaft de juiste ruimtelijke verpakking, de vorming van een specifieke antigene structuur en het verschijnen van biologische activiteit in omhulde glycoproteïnen. Na glycosylering kunnen de eiwitten E1 en E2 bovendien worden uitgescheiden uit de cellen en worden ze beter beschermd tegen bepaalde proteolytische enzymen van de cel.

Beide HCV glycoproteïne transmembraaneiwitten van het type I, die worden gekenmerkt door de aanwezigheid van NH2-terminaal ectodomein (het zogenaamde eiwit gedeelte bloot van het lipide dubbellaag membraan van het virus), en het COOH-uiteinde van het transmembraangebied. één of twee transmembraan strengen betrokken bij de vorming van E1-E2-complex en vasthouden glycoproteïnen in de lipide dubbellaag membranen in virus E1 en E2-eiwitten [106-108].

Onlangs hebben wetenschappers grote aandacht besteed aan het zoeken in de omhulde glycoproteïnen van het HCV-fusiepeptide, dat de lipidedubbellagen van het endosoom en het virus combineert. Voor de HCV wordt een model (dat gedeeltelijk is bevestigd) van penetratie in de cel voorgesteld door analogie met de proceskarakteristiek van het tekengedragen encefalitisvirus. Volgens dit model wordt bij contact van HCV met de receptor een virus-receptorcomplex gevormd, dat als een endocytische vacuole de cel penetreert (dit proces wordt ook receptor-gemedieerde endocytose genoemd). In de volgende fase wordt de vacuole van de endocytose vermengd met het endosoom (cytoplasmatische vesiculaire celstructuur), dat wordt gekenmerkt door lage pH-waarden. Onder invloed van de zure omgeving van het endosoom ondergaan de glycoproteïnen aan het oppervlak van HCV conformatieveranderingen die leiden tot de blootstelling en introductie van het fusiepeptide in het endosomale membraan. Dit proces triggert de fusie van de lipidebilaag van het virus en het endosomemembraan, die eindigt met de afgifte van HCV-RNA in het cytoplasma van de cel.

Tot op heden is niet vastgesteld welke van de twee glycoproteïnen van de HCV-envelop het peptide van de fusie is. Er zijn verschillende veronderstellingen over de lokalisatie ervan in het El-eiwit: in het gebied met aminozuurresiduen 265-287 of 272-281 of 275-293 [107, 109]. Een overeenkomst in de primaire structuur van het vermeende HCV-fusiepeptide-subtype la (ako 265-287) met vergelijkbare peptiden is gevonden in sommige leden van de Flaviviridae-familie (Figuur 6) [109].

In het glycoproteïne El van de HCV werden vier N-glycosyleringsplaatsen geïdentificeerd: dit zijn asparagineresten op posities 196, 209, 234 en 305 [110-112]. Toepassen van de werkwijze van puntmutaties in het virale RNA dat codeert voor het E1 eiwit aantonen dat het verdwijnen van de glycosyleringsplaatsen op positie 209 en 234 laat de vorming van de E1-E2 complex [110, 113]. Oligosaccharideresten

Fig. 6. Primaire structuur van het fusie-peptide in individuele leden van de Flaviviridae-familie [109].

TBE - Tekenencefalitis virus, VZHL - gele koorts virus, VYAE - Japanse encefalitis virus, een dag - dengue virus, Gunwi County - Cunha virus, WNV - West-Nijl virus. HCV onderstreepte voorkomende aminozuurresiduen (twee 2 cysteine ​​en glycine), cursief aminozuurresten, vergelijkbaar in hun fysisch-chemische eigenschappen.

in posities 196 en 305 zijn nodig voor een goede ruimtelijke stapeling van het El-eiwit, en ook voor de vorming van het E1-E2-glycoproteïnecomplex. Bovendien is aangetoond dat koolhydraatresiduen op positie 196 en 209 van het glycoproteïne El noodzakelijk zijn om de infectiviteit van het virus te handhaven [112].

In Fig. 7 geeft een hypothetisch model weer van de ruimtelijke stapeling van het El-eiwit, berekend uit de gegevens van proteomische analyse, computersimulatie en vergelijkende analyse met envelopeiwit E van het door teken overgedragen encefalitisvirus.

De oligosaccharide ketens van glycoproteïnen van HCV meestal gevormd 6-9 mannoseresiduen verbonden met twee N-acetylglucosamineresten [114, 115]. Alleen E2-eiwit gedetecteerd meer complex type Oligosacchariden met minder mannose residuen, die gedeeltelijk vervangt fucose en N-acetylglucosamine residuen in de eindstand van de oligosaccharide keten [115].

Het glycoproteïne E2 gedetecteerd 11 glycosylatieplaatsen op asparagine-residuen op positie 417 (1) 423 (2) 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) en 645 (11) [111, 112, 115].

Er wordt aangetoond dat het complex van glycoproteïnen E1-E2 niet wordt gevormd als

Fig. 7. Het schema van de voorgestelde ruimtelijke structuur van het El-eiwit wordt gepresenteerd in een eenvoudige modificatie uit het artikel van R.F. Garry en S. Dash [107].

Legende: touw - polypeptideketen, cilinders - alfahelix, pijlen - bètastructuur, drietanden - oligosaccharideketens, zwarte segmenten - disulfidebindingen.

er is geen oligosaccharideketen op positie 10 van het HCV E2-eiwit.

Het virus verliest zijn infectiviteit als er geen koolhydraatresiduen in het glycoproteïne E2 zijn op posities 1, 2, 4, 8, 10 en 11 [111]. Bovendien is vastgesteld dat oligosaccharideketens op posities 1, 6 en 11 deelnemen aan de vorming van epitopen waarop virusneutraliserende antilichamen worden gevormd [108, 116].

Er werd gevonden dat virussen van subtype la en 3a verschillen in het aantal oligosaccharideketens in omhulde eiwitten [117]. In het glycoproteïne E2 zijn er, in tegenstelling tot het El-eiwit, gemodificeerde oligosaccharideresten op positie 423 en 430 [115, 116].

Glycoproteïne E2 is moeilijk te bestuderen door fysisch-chemische methoden van eiwitstructuuranalyse, voornamelijk vanwege de grote hoeveelheid koolhydraatresiduen. De overvloed aan oligosaccharideketens in het glycoproteïne E2 maakt het moeilijk om een ​​eiwitkristal te verkrijgen voor röntgendiffractie-analyse en om nucleaire magnetische resonantie uit te voeren. Daarom werd een model van de secundaire structuur voor de ingekorte vorm (ectodomein) van het E2-eiwit gemaakt met behulp van computerprogramma's die eiwitvouwing voorspellen en een vergelijkende analyse van de reeds bestudeerde omhulde eiwitten van de Flaviviridae-familie [112]. Het ectodomein is een fragment van het glycoproteïne E2 (ako 384-660) zonder zijn transmembraandeel, dat veel van de biologische eigenschappen bezit die inherent zijn aan het E2-eiwit van volledige lengte. Het kan een complex vormen met het glycoproteïne El, interactie aangaan met monoklonale antilichamen tegen de conformationele epitopen van eiwit E2, evenals met heparinesulfaat en sommige cellulaire receptoren.

In dit ruimtelijke model van ectodomein van glycoproteïne E2, voorgesteld door A.T. Yagnik et al., Onthulde een laag gehalte aan secundaire structuurelementen (ongeveer 37%) en een overwicht van ongeordende sites [113]. Elementen van de secundaire structuur worden voornamelijk vertegenwoordigd door beta-vouwgebieden en verschillende korte alfa-helixfragmenten. Dit is het eerste en tot nu toe het enige model van het glycoproteïne E2, dat blijkbaar de werkelijke secundaire structuur met enige benadering weerspiegelt. Gezien de complexiteit en ambiguïteit van dit model is het niet duidelijk vertegenwoordigd.

Een van de belangrijkste kenmerken van de primaire structuur van het E2-eiwit is de aanwezigheid van regio's met een niet-constante aminozuursequentie, die variabel en hypervariabel worden genoemd [118, 119]. In het E2-eiwit werden drie regio's gevonden met een zeer hoge frequentie van aminozuursubstituties, dit zijn hypervariabele regio's (HWR's). Oorspronkelijke HWR gelokaliseerd in het NH2-terminale deel van het E2-eiwit op de plaats met aminozuurresten 384-411, HWR tweede - op de site met resten 474-482 en het derde onlangs ontdekt, - op de site met resten 431-466 of 434-450 [120- 122].

Er werd vastgesteld dat de eerste HWR, ondanks de hoge frequentie van aminozuursubstituties, altijd de totale positieve lading en het stabiele profiel van hydrofiliciteit / hydrofobiciteit behoudt.

Bovendien zijn de vier aminozuurresten ervan op posities 385, 389, 406 en 409 zeer conservatief, d.w.z. E. ze komen heel vaak voor in de bestudeerde isolaten van HCV [123, 124]. Alle verscheidenheid van aminozuursequentievarianten van het eerste HWR kan worden gereduceerd tot de consensus sequentie die is samengesteld uit de meest algemeen voorkomende aminozuurresten in elk van de 27 posities (384-411) van het E2-eiwit gedeelte [124, 125]. De biologische rol van de eerste HWR is de vroege stadia van HCV sorptie verschaffen op het celoppervlak en in de "bewegend doel" presenteren het immuunsysteem, die wordt gevormd door het continu veranderen van nieuwe antigene varianten van dit eiwit E2 gebied [31, 123, 126].

Er zijn aanwijzingen dat de tweede en derde HRV zijn betrokken bij de binding van HCV aan cellulaire receptoren [121, 127].

Vanwege de aminozuurvariabiliteit van alle drie de hypervariabele gebieden van het glycoproteïne E2, worden de zogenaamde ongrijpbare varianten van het virus gevormd, d.w.z. zodanig, waarvoor op dit moment geen immuunrespons bestaat.

Een ander kenmerk van het envelopeiwit E2 - de aanwezigheid van polypeptidekettingsites die overeenkomsten hebben met andere eiwitten.

Dit fenomeen wordt moleculaire mimiek genoemd. Aldus vormen twaalf geconserveerde aminozuurresten (positie 660-671) van het E2-eiwit een ReHDD-domein dat identiek is aan de fosforyleringsplaats in de ribosomale eIF2a-translatie-initiatiefactor [128]. Vanwege deze gelijkenis kan HCV het antivirale effect van IFN-alfa stoppen. Eiwitkinase R na activering door interferon-alfa zou de eIF2a-factor moeten fosforyleren, wat op zijn beurt leidt tot een stop in de translatie van HCV-RNA. Maar het E2-eiwit, met behulp van het ReHDD-domein, interageert met proteïnekinase R in plaats van de eIF2a-factor, en de biosynthese van virale eiwitten gaat door [129].

In het NH2-terminale deel van het E2-eiwit werd moleculaire mimiek waargenomen met coupes van de lichte en zware ketens van immunoglobulinen en met de T-celreceptor [118]. Er wordt gesuggereerd dat deze structurele gelijkenis de oorzaak kan zijn van auto-immuunziekten bij patiënten die zijn geïnfecteerd met HCV, zoals gemengde type II-cryoglobulinemie en B-cel non-Hodgkin-lymfoom [130].

Zoals hierboven vermeld, verschaffen de omhulde eiwitten van HCV de interactie van het virus met cellulaire receptoren. Er werd vastgesteld dat deze resten oligosaccharide shell glycoproteïnen kan een centrale rol bij de binding van het virus te spelen met de potentiële receptoren zoals DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) en de asialoglycoproteïnereceptor [117, 131, 132]. De eerste twee potentiële receptoren zijn type-C-lectine-eiwitten en functioneren als oppervlakteadapteremoleculen die celcontacten tussen dendritische, endotheliale en T-cellen verschaffen. L-SIGN receptor aanwezig is op het oppervlak van endotheliale cellen van de sinusoïden van de lever en lymfeknopen en DC-SIGN - op het dendritische celoppervlak. Deze receptoren hebben speciale calcium-afhankelijke koolhydraatherkenningsdomeinen (CRD), die kunnen binden aan de koolhydraatresiduen van de E1- en E2-eiwitten [117, 131]. Aangezien DC-SIGN en L-SIGN-receptoren niet worden gevonden in hepatocyten, kunnen ze niet worden beschouwd als de belangrijkste doelen van HCV. Deze receptoren vangen, accumuleren het virus en brengen het over naar T-cellen en mogelijk hepatocyten.

De asialoglycoproteïne-receptor is aanwezig op het oppervlak van de levercellen en maakt de penetratie mogelijk van glycoproteïnen die aan het einde van de koolhydraatketens geen siaalzuurresidu bevatten. Met deze receptor zijn recombinante eiwitten E1 en E2, verkregen door expressie van overeenkomstige fragmenten van HCV-RNA in insectencellen, specifiek geassocieerd [132].

Er is vastgesteld dat het recombinante E2-eiwit interageert met een andere potentiële virale receptor (of coreceptor), het transmembraan CD81-eiwit [133]. Deze receptor is aanwezig op het oppervlak van de meeste cellen (behalve erythro- en bloedplaatjes) en neemt deel aan cellulaire functies geassocieerd met adhesie, mobiliteit, metabole activering en transformatie. CD81 behoort tot de tetrapanine-eiwitgroep en heeft een karakteristieke structuur: 4 transmembraandraden en een grote en kleine extracellulaire lus. Er werd aangetoond dat een groot extracellulair lus-CD81 zich specifiek bindt aan het recombinante E2-virale eiwit [133].

In de A.T. Yagnik en co-auteurs in deze interactie hebben betrekking op twee oppervlakgebieden van het eiwit E2 met ako 474-494 en 522-551 [112]. In een later onderzoek werd echter gevonden dat aminozuurresiduen van eiwit E2 op posities 420, 527, 530 en 535 in contact komen met de grote lus van CD81 [134].

Experimenten met HPV, HPV en natieve virus uit het serum van patiënten met CHC bevestigd dat CD81 is betrokken bij het proces van HCV binnenkomst in de cel, maar anders dan andere eiwitten die endocytose [77, 78, 134] stimuleert nodig. Met behulp van CD81 en dit eiwit zullen virionen die niet zijn geassocieerd met lipoproteïnen de cel binnengaan, omdat het contact van het virale glycoproteïne E2 en CD81 nodig is. Het is bekend dat de inhoud van dergelijke virionen ongeveer 20% is (zie paragraaf 1.2). Op deze manier de cel kan doordringen in virions die niet zijn geassocieerd met lipoproteïnen, aangezien de vorming van HCV complex met hen natuurlijk voorkomt contact met het E2-glycoproteïne receptor CD81.

Tot 80% van HCV bevindt zich in het lichaam van geïnfecteerde mensen in de vorm van een complex met lipoproteïnen (dit zijn de zogenaamde lipovirale deeltjes). Deze deeltjes komen de cellen binnen met behulp van een receptor voor LDL (zie paragraaf 1.2) en een andere SR-BI-receptor (een andere aanduiding is Cla-1) [126]. De SR-BI-receptor wordt gevonden op het oppervlak van veel cellen, maar het hoogste gehalte wordt genoteerd in de lever en steroïdogene weefsels. De belangrijkste functie van deze receptor is om de lipiden die deel uitmaken van de lipoproteïnen met hoge dichtheid aan de cellen af ​​te geven. De SR-BI-receptor behoort tot transmembraaneiwitten. Het heeft twee membraanstrengen, een grote extracellulaire lus en twee korte cytoplasmatische gebieden in de NH2- en COOH-terminale regio's [135]. Er is vastgesteld dat de eerste HVR van recombinant eiwit E2, HPV en een virus afgeleid van een celkweek kan worden geassocieerd met deze receptor [136-138]. HCV uit bloedserum van mensen met hepatitis C interageert echter met de SR-BI-receptor zonder deelname van het eerste HWR- en het E2-eiwit [118].

Om dit verschijnsel te verklaren, werd gesuggereerd dat het virus de cel binnendringt met behulp van een multicomponentreceptorcomplex gevormd door CD81-SR-BI [77, 138].

Het is bekend dat negatief geladen koolhydraatketens van oppervlakte-glycoproteïnen van de cel kunnen dienen als centra van primaire binding van verschillende virussen [139]. Door dit proces stijgt het virusgehalte op het celoppervlak en neemt de kans op interactie met een specifieke receptor toe. Experimenten met betrekking tot de binding van HCV aan hepatocytische celkweken hebben aangetoond dat dit proces kan worden geblokkeerd door heparine en suramine met een negatieve lading [140]. Het gedeelte dat specifiek bindt heparine, waarschijnlijk gelocaliseerd in de eerste HWR glycoproteïne E2 en / of in een gebied met ako 559-614 waarbij bleek een hoog gehalte van de positief geladen aminozuurresten [112, 126]. In experimenten met pseudoviral HCV-deeltjes werd echter geen interactie van het E2-eiwit met heparine waargenomen [141]. Het is duidelijk dat de betrokkenheid van glucosaminoglycanen in het complexe proces van HCV-penetratie in de cel verder onderzoek vereist.

Zoals blijkt uit onderzoeken die in het afgelopen decennium zijn uitgevoerd, heeft HCV een breed cellulair tropisme. Het virus repliceert in hepatocyten, perifere mononucleaire cellen en ascites, lymfe en monocyten [142-144], dendritische cellen [52, 145], hematopoietische progenitorcellen [146], microglia [38] cardiomyocyten [147], het darmepitheel [ 148], osteoblasten [149] en B-cel follikels van lymfeklieren [150]. Dit is waarschijnlijk de reden waarom er meer dan één receptor is voor HCV.

Veel aandacht in de studie van shell-eiwitten wordt gegeven aan de analyse van hun antigene en immunogene eigenschappen, omdat deze informatie nodig is voor de ontwikkeling van vaccins tegen hepatitis C.

Er werd vastgesteld dat glycoproteïnen E1 en E2 een hoge immunogeniciteit hebben. Dus, bij het immuniseren van chimpansees met recombinante envelopeiwitten, werden specifieke antilichamen tegen deze eiwitten met een titer van 1/819200 [15] verkregen. In het natuurlijke verloop van acute en chronische hepatitis C bij mensen is de humorale respons op virale glycoproteïnen E1 en E2 echter veel zwakker.

Gepubliceerde gegevens over de detectie van lineaire B-epitopen in eiwitten E1 en E2 zijn weergegeven in de tabel. 1. Voor de analyse van deze epitopen werden de werkwijzen van peptide-scanning, faagdisplay en monoklonale antilichamen gebruikt. De werkwijze van peptide-scanning is gebaseerd op het gebruik van synthetische peptiden die de gehele aminozuursequentie van het eiwit omvatten en het bepalen van hun immunoreactiviteit, dat wil zeggen E. vermogen om te interageren met antilichamen van patiënten met hepatitis C. Voor het eerst werd een dergelijke studie van HCV-envelopeiwitten uitgevoerd in de onderneming Chiron (VS) [151]. Later, in 1997, werden de resultaten van peptide-scanning van glycoproteïnen E1 en E2 gepubliceerd, waarin

Unieke sera van vrouwen die 17 jaar geleden waren geïnfecteerd met een enkel HCV-isolaat, dat het geneesmiddel met anti-D-immunoglobuline verontreinigde, werden gebruikt [152].

Door de inspanningen van drie groepen onderzoekers, geleid door J. Dubuisson, M. Flint en A.H. Patel, bank muriene en humane monoklonale antilichamen werd vastgesteld (ICA) HCV waarmee sommige lineaire en conformationele B-epitopen kunnen identificeren shell E1 en E2-eiwitten [79, 109, 153-155].

In Fig. 8 toont de rangschikking van B-epitopen in het glycoproteïne E2, gedetecteerd met behulp van MCA.

Van bijzonder belang zijn B-epitopen, de binding van antilichamen waartoe leidt tot de neutralisatie van het virus. Een dergelijk virusneutraliserend epitoop werd gedetecteerd in het eerste HBP van eiwit E2 [156].

Een ander epitoop, dat de binding van het virus aan de cel neutraliseert (het zogenaamde NOB-epitoop van de "neutralisatie van binding"), heeft

Fig. 8. Locatie van B-epitopen gedetecteerd door MCA in eiwit E2.

Het schema wordt gegeven met kleine veranderingen in de publicaties van R.F. Clayton et al. [79] en A.M. Owsianka et al. [155].

Aan de bovenkant van de rechthoeken herkennen de MKA het ectodomein van het E2-eiwit, het E2-eiwit met de volledige lengte in combinatie met het E1- en E2-eiwit in de HPV-samenstelling. Hieronder worden MKA weergegeven, interactie met ectodomein van E2-eiwit of met eiwit E2 van volledige lengte in complex met E1-eiwit. In het zwart wordt MCA-remmende binding aan CD81 ectodomein E2, E2-eiwit met de volledige lengte in combinatie met E1 en HPV in het zwart gemarkeerd. Grijze kleur wordt gemarkeerd door MCA die de binding van HPV aan CD81 remt.

conformationele structuur in de formatie die door aanname, een groep auteurs betrokken aminozuurresten 406-644 van het E2-eiwitsequentie [76, 156, 157] en, volgens andere - overblijfselen van de sequenties 414-443 en 490-519 [158 ].

Het is aangetoond dat een ander meer gecompliceerd conformationeel B-epitoop dat geen virusneutraliserende eigenschappen bezit kan worden gevormd door aminozuurresten van 3 plaatsen:

297-306 eiwit E1, 480-494 en 613-621 eiwit E2 [167].

In de glycoproteïnen El en E2 werden T-helper (CD4 +) en T-killer (CD8 +) epitopen geïdentificeerd (Tabel 2).

Momenteel worden studies over de lokalisatie en structuur van B- en T-epitopen van HCV-envelopeiwitten voortgezet. Informatie over dit onderwerp is te vinden op de website van het National Laboratory van Los Alamos (VS): http://hcv.lanl.gov.

* Als 20-ledige peptiden werden gebruikt om het epitoop te bepalen, dan is er geen exacte lokalisatie.

2.2. Nucleocapsid-antigeen Het schema van de lokalisatie van nucleocapside-eiwit (synoniemen: kern, kern) in het polyeiwit wordt getoond in Fig. 1. Dit eiwit is betrokken bij belangrijke fasen van de morfogenese van het virus: creëert viraal nucleocapside initiëren HCV RNA verpakking en assemblage van de virale envelop [74, 178, 179].

Waarschijnlijk bezit het cor-eiwit andere biologische functies. Dus in verschillende type experimenten blijkt dat het samenwerkt met de regulerende eiwitten en bepaalde structurele elementen van de cel: Eiwit p53 [179], een eerste receptor voor tumornecrosefactor [180] receptor lymfotoxine-beta [181], transcriptie LZIP factor [182 ] STAT3 eiwit (dat transcriptie signaal versterkt) [183], heterogene nucleaire ribonucleoprotein K [184] helicase DDX3 [185] cytoplasma triglyceride vesicles [186], mitochondria [187] cytokeratine cellen [188]. Gemeend wordt dat korbelok deelneemt aan het ontstaan ​​van steatose en hepatocarcinogenesis bij patiënten met chronische hepatitis C [179, 186].

Nucleocapsideproteïne wordt eerst gevormd onder alle virale eiwitten in het proces van biosynthese, het wordt gesplitst van het polyproteïne door signaalpeptidasecellen [190]. Bij de uiteindelijke proteolytische hydrolyse van het kerneiwit neemt de nieuw ontdekte peptidase peptidase SPP, die een ongewone intramembrale splitsing omvat, deel [189, 190].

Verwerking nucleocapside-eiwit gepaard gaat met de overgang van zijn vorm p23 (193 ako) in p21 (173 ako) en fosforylering van hydroxylgroepen van serine- residu's [189]. De gesplitste locatie (174-193 ako) draagt ​​een translocatiesignaal, waardoor het NH2-terminale deel van het El-eiwit de ESR-reservoirs binnengaat [191].

De rijpe vorm van het cor-eiwit heeft een goed gedefinieerde amfipathische structuur: een hydrofiel NH2-terminaal gebied en een hydrofoob COOH-terminaal gebied [192]. Dienovereenkomstig worden het domein Dl (hydrofiel) en domein D2 (hydrofoob) geïsoleerd in het eiwit. Een vergelijkbare structuur is kenmerkend voor de nucleocapside-eiwitten van de Flaviviridae-familie. Soms wordt een derde domein (centraal), dat een ongewoon hoog gehalte aan tryptofaanresiduen heeft, ook geïsoleerd in het cor-eiwit (46).

De hydrofiele D1 domein de bindingsplaats van RNA, de belangrijkste conservatieve B-epitopen en een fragment verantwoordelijk voor dimeervorming van de kern-eiwitten [192]. De functioneel actieve vorm van het nucleocapside-eiwit wordt gevormd door twee polypeptideketens, d.w.z. cor-eiwit is een dimeer waarin de alfa-spiraalvormige structurele organisatie overheerst. Het hydrofobe domein D2, die samen met lipidemembranen en cytoplasma insluitingen verschaft liggen amfipathische a-helix met een uitgesproken hydrofiele en hydrofobe oppervlakken.

Van alle virale eiwitten heeft het cor-eiwit het hoogste gehalte aan conservatieve zones in de primaire structuur [193].

De locatie van de belangrijkste functioneel belangrijke gebieden van het nucleocapside-eiwit is in Fig. 9. In deze belangrijke gebieden Opgemerkt gebied anker-eiwit met 72-91 aminozuurresten dat interageert met het manteleiwit E1 [194] gedeelte met resten 69-104 noodzakelijk besmettelijkheid van HCV [195] zone 65 residuen behouden -72, die waarschijnlijk contact met het peptide p7 in de vroege stadia van morfogenese van het virus [195].

Volgens elektronenmicroscopie is het kerneiwit gelokaliseerd in de cel op EPR-membranen, op lipide vesikels in het cytoplasma en in de kern. De overdracht van het eiwit naar de kern van de cel wordt uitgevoerd door het cellulaire transporteiwit bisparnin NLS, dat in dit geval een interactie aangaat met een speciale signaalsequentie in het kerneiwit [196].

Onderzoek nucleocapsiden van het natieve serum en hun analogen verkregen door toepassing van HCV replicon bleek dat ongeacht hun oorsprong hebben ze een sedimentatiecoëfficiënt van ongeveer 100 S, opwaartse dichtheidsgradiënten in

Fig. 9. De rangschikking van de belangrijkste functioneel belangrijke plaatsen in het nucleocapside-eiwit wordt gegeven met kleine veranderingen van het artikel door C.L. Murray et al. [195].

Hieronder geven nummers de aantallen aminozuurresten aan.

cesium 1,28 g / ml en een diameter van 33-46 nm, bepaald met behulp van een transmissiemicroscoop [197, 198]. Volgens de elektronenmicroscopische analyse van leverbiopsiespecimens van mensen met CHC, fluctueert de omvang van de nucleocapsiden van het virus in dit geval intensiever: van 28 tot 48 nm [198].

Het kerneiwit is een van de meest immunogene antigenen van HCV. Gegevens over zijn B- en T-epitopen worden gegeven in de tabel. 3 en 4.

Er dient te worden opgemerkt dat de B-epitopen van het nucleocapside-eiwit hoofdzakelijk zijn geconcentreerd in het hydrofiele domein en in de conservatieve gebieden.

2.3. Karakterisering van het NS2-eiwit Het NS2-eiwit verwijst naar niet-structurele HCV-eiwitten, het bevindt zich in het polyproteïne na het peptide p7 (zie figuur 1). Het NS2-eiwit heeft een molecuulgewicht van ongeveer 23 kDa, bevat geen koolhydraatresiduen en is gebonden aan EPR-membranen [206, 207]. Exacte eiwit topografie in het membraan is niet vastgesteld, er wordt aangenomen dat het 3 transmembraandraden vormt (zie figuur 5) [90]. Eiwit NS2 is slecht oplosbaar, dus het is moeilijk om te studeren.

De belangrijkste biologische functie van het NS2-eiwit is de splitsing van het HCV-serineprotease. Voor de implementatie ervan vormt het NS2-eiwit een complex met een polyproteïnenite die overeenkomt met het NS3-eiwit [206, 208].

"Kazan (Privolzhsky) Federale Universiteit. NI Lobachevsky Nieuwe boekingen bij het Fonds van de Nationale Bank van 27 juni tot 4 september 2015 Kazan Records worden gemaakt in RUSMARC-formaat met behulp van de "Ruslan" ALIS. Het materiaal is systematisch gerangschikt volgens de takken van kennis, in secties - in het alfabet van auteurs en titels. Met de omslag, het abstract en de inhoud van de publicatie is te vinden in de elektronische catalogus Onbekende titel Materialen van de All-Russian Conference p. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Tyumen State University "Instituut Biologie, Faculteit Ecologie en Genetica, ON Zhigileva ECOLOGISCHE PARASITOLOGIE Educatief en methodisch complex. Het werkprogramma voor studenten in de richting van de voorbereiding 06.03.01 Biology (Hbo-niveau), opleiding profielen "Bio-ecologie", een vorm van training full-time Tyumen State. "

"Het ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van State Educational Institution of HBO Tyumen State University Instituut Biologie, afdeling Zoölogie en Evolutionaire Animal Ecology AV Tolstikov, V.A. Stolbov ENTOMOLOGIE Educatief en methodisch complex. Het werkprogramma voor studenten in de richting van de voorbereiding 35.03.10 Landschapsarchitectuur, profiel training siergewassen als boomkwekerijproducten, het trainen van full-time vorm van Tyumen. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Tyumen State University "Instituut Biologie, Afdeling van de menselijke anatomie en fysiologie en dierlijke Lepunova ON ANATOMIE EN MENSELIJKE MORFOLOGIE Educatief en methodisch complex. Het werkprogramma voor studenten 06.03.01 richting "Biology", secties: plantkunde, zoölogie, fysiologie, genetica, bioecology, biochemie; vorm van training. "

district "MUNICIPAL" Bezhanitsy "gemeentelijke budgettaire instellingen in het algemeen onderwijs" Bezhanitsky SECONDARY SCHOOL "Overeengekomen om methodische Raad bevestigen №1 belangrijkste notulen van 2014/08/27 _ / SK Mikheev Order nummer 71 gedateerd 29.08.201 WERKPROGRAMMA over onderwerpen BIOLOGIE algemeen basisonderwijs, Rang 6 op de 2014-2015 academiejaar Master Irina Vasilyeva Bezhanitsy 2014 1.Poyasnitelnaya nota Werken aan de biologie programma voldoet aan Federal. "

"Ministerie van Landbouw van de Russische Federatie Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Kuban State Agrarische Universiteit »Department of Microbiology, Virologie en epizootology richtsnoeren inzake discipline: B1.V.DV.1" Veterinary Virology "voor zelfstudie doctorale opleiding in de richting van 2 bereiding 36.06.01 Diergeneeskunde en zoötechniek, oriëntatie: "Veterinaire microbiologie, virologie. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van Kaluga regio overheidsbegroting instelling van extra onderwijs van Kaluga regio" Regional Ecological and Biological Center "Algemeen Secundair algemene ontwikkelingsprogramma" Pantry van de natuur "voor leerlingen van de basisschool leeftijd (7-11 jaar) uitvoeringsperiode van -2 jaar samengesteld door docenten van extra onderwijs : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Inhoudstafel Toelichting Programmagerelevantie: doelstellingen en doelstellingen van het programma. "

" Theoretische mechanica "Richtlijnen voor praktijkonderwijs in de 2e jaar van de medische en biologische faculteit in 2012-2013 academisch jaar 1 semester specialiteit 201000 - Biotechnische systemen en technologieën 1. Introductieles. Bewegingsvergelijkingen en traject vergelijking tochki.Reshite volgende taken: 1. Volgens de bewegingsvergelijkingen van een punt van zijn baan eerst de vergelijking in coördinatenvorm en selecteer richting in figuur 1) x = 3t -5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2;. "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Pagina 1 Print Website van de Faculteit Biologie gedrukte versie of terugkeren Shalapenok Elena Semenovna Personnel Department of Zoology, biologische faculteit BSU. PEOPLE afdeling Zoölogie Onderwijs Personeel onderwijs en steun van de wetenschappelijke staf van promovendi en studenten Shalapenok Elena Semenovna (1931-2010) Associate Professor, Department of Zoology, PhD, Associate Professor Graduate van de Wit-Russische. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Penza State University Goedgekeurd door: Rector _ AD Gulyakov '' _ 201, het registratienummer intrahigh elementaire professionele educatieve programma's van Hoger Onderwijs Richting van de voorbereiding 020 400 Biology Profiel Bioecology training kwalificatie (graden) afgestudeerd aan Bachelor-modus van de studie Full-time Penza 2013 INHOUD 1 ALGEMEEN. 1.1 Het belangrijkste professionele onderwijsprogramma van het hoger onderwijs. "

"Abstract het werkprogramma over het onderwerp" biologie "op de 2014-2015 studiejaar Rang 9 Het doel van het werkprogramma - het scheppen van voorwaarden voor de planning, organisatie en het beheer van het onderwijsproces op het gebied van biologie, zie" Fundamentals of de algemene biologie".Rabochaya programma bestaat uit de volgende onderdelen: Section 1. Een toelichting waarin de algemene doelen van het algemeen onderwijs worden gespecificeerd in het licht van de specifieke kenmerken van het onderwerp. Het werkprogramma is gebaseerd op een bij benadering kernprogramma. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Tyumen State University "Instituut Biologie, Faculteit Ecologie en Genetica, ON Zhigileva BASIS VAN ECOLOGIE Educatief en methodisch complex. Werkprogramma voor studenten op het gebied van training 42.03.02 Journalistiek (bachelorniveau), trainingsprofielen "Zegel", "Televisiejournalistiek", "Convergente journalistiek". "

"Het ministerie van Onderwijs en Wetenschappen, de Federale Staat onderwijsinstelling van HBO Tyumen State University Institute of Biology Department of Botany, biotechnologie en landschapsarchitectuur Marina V. Semenova bio-ecologische basis samenstelling met planten Teaching Materials. Werkprogramma voor studenten van de richting 35.03.10 Landschapsarchitectuurprofiel Landschap en landschap. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van HBO Tyumen State University Institute of Biology, Ministerie van Plantkunde, Biotechnologie en landschapsarchitectuur EIGENSCHAPPEN Belozerova A.A.MORFOBIOLOGICHESKIE VAN sierplanten Teaching Materials. Werkprogramma voor studenten van de richting 35.03.10 Landschapsarchitectuur van de interne vorm van de profieltraining Decoratieve plantenteelt en. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Tyumen State University "Institute of de afdeling Zoölogie en Evolutionaire Ecologie van Dieren OA Aleshina BASIS ONDERWIJS ALL-BIOOLOGISCHE PRAKTIJK: ZOOLOGIE VAN ONDERSCHEIDERS Educatief en methodisch complex. Werkprogramma voor studenten op het gebied van opleiding 06.03.01 - "Biologie" (academische bachelor), profiel van opleiding. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van het HBO" Tyumen State University "Instituut Biologie, Afdeling van de menselijke anatomie en fysiologie en dierlijke Lepunova ON Moleculaire biologie van virussen of andere intracellulaire parasieten lesmateriaal. Werkprogramma voor studenten 06.03.01 routebeschrijving "Biologie", profiel: biochemie; vorm van onderwijs - fulltime Tyumen. "

"Federale Biomedische Agentschap van Staat Organisatie gezondheid" van de Siberische Medisch Centrum van de Federale Medische en Biologische Agency "(FGBUZ SOMTS FMBA van Rusland) NORMEN EN TECHNOLOGIE praktijkondersteuners Guidelines professionele activiteiten van een verpleegkundige procedurele Novosibirsk 2013 Federal Biomedical Agency BEGROTINGSINSTELLING VAN DE FEDERALE STAAT VAN DE GEZONDHEID. "

"Ministerie van Onderwijs en Wetenschappen van DE RUSSISCHE FEDERATIE Federale Staat onderwijsinstelling van HBO Tyumen State University Institute of Biology, Ministerie van Plantkunde, Biotechnologie en landschapsarchitectuur SP Arefiev TAXATION Educatief en methodisch complex. Het werkprogramma voor de studenten van de richting 35.03.10 Landschapsarchitectuur full-time profiel van de opleiding siergewassen als boomkwekerijproducten Tyumen State University. "

Far Eastern State University Isayev Synergetics biologie Inleidende Textbook Vladivostok werkmap wordt samengesteld op basis van een cursus van lezingen voor studenten van de afdeling Celbiologie van het Verre Oosten State University, voorgelezen door de auteur voor meerdere jaren, en is aangepast voor biologen, vereenvoudigde en geïllustreerde de basisideeën van niet-lineaire wetenschap (vaak genoemd synergetica), inclusief de theorie van bifurcaties en. "

"Gemeentelijke budgettaire algemene onderwijsinstellingen te" Average General Education School №18 "wordt beschouwd als op een bijeenkomst van" overeengekomen " Approved "Shmo Natuurwetenschappen adjunct-directeur, directeur MBOU«School №18»Head TI Antonovich op UVR LA Ishutina V.N. Nikitin protocol №1 van "23" mei 2014 PROGRAMMA academische onderwerpen BIOLOGIE KLASSE 9 May (GEF) Abakan Toelichting Dit biologie programma is gebaseerd op de federale staat Educational Standard. "


Gerelateerde Artikelen Hepatitis